[发明专利]一种固定钩状木霉孢子制备Cr(VI)还原剂的方法

权利要求书

1.一种固定钩状木霉孢子制备Cr(VI)还原剂的方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：

(1)钩状木霉(Trichoderma hamatum)NYNJ03孢子悬浮液的制备：取保存于-80℃冰箱中钩状木霉NYNJ03菌株，采用无菌操作技术接种直径为0.4cm菌片于固体PDA培养基中，放置在30℃恒温培养箱中培养6-8天，向培养钩状木霉NYNJ03的平板中缓缓加入5mL灭菌后的PBS，放在震荡培养箱中轻摇20min，将平板表面孢子刮下，脱脂棉过滤，用无菌水反复冲洗两遍，滤液体积达到20mL，即得到分生孢子悬浮液；

(2)聚乙烯醇-海藻酸钠-PDA培养基(PVA-SA-PDA)核壳结构小球的制备：固体PDA培养基在室温下冷却之后，用刀片将PDA切割成细碎的立方体，配制固定化基质，用16G注射器针头吸取固定化基质并将PDA包裹推入交联溶液中，观察小球形态情况；

(3)Cr(VI)还原剂的制备：在固定化基质中添加孢子悬浮液混合，将得到的含分生孢子的混合物，用16G注射器针头吸取固定化基质并将PDA包裹推入交联溶液中，然后在4℃下储存使用；所述的钩状木霉NYNJ03，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2014年07月03日，保藏编号为CGMCC No：9333；

步骤(2)中所述固定化基质为称量PVA 2g、SA 1g在75℃-80℃水浴锅中用无菌水加热溶解，在室温环境中放置12小时，再放置水浴锅中1h，反复操作三次，在最后一轮水浴中，使混合物的温度降低至40℃，备用；

步骤(2)和(3)中所述交联溶液为称取30g硼酸溶于去离子水中，加热溶解，冷却后加入30g氯化钙，用玻璃棒充分搅拌均匀，混合，转移到1000mL容量瓶中定容，作为交联液保存备用。

2.根据权利要求1所述的一种固定钩状木霉孢子制备Cr(VI)还原剂的方法，其特征在于步骤(1)中所述于30℃恒温培养箱中培养7天。

3.根据权利要求1所述的一种固定钩状木霉孢子制备Cr(VI)还原剂的方法，其特征在于步骤(1)中所述0.4cm菌片为将钩状木霉NYNJ03接种至固体PDA培养基培养3-5天，直至培养基中长满菌丝，用1000μl枪头倒转轻压制成。

4.根据权利要求1所述的一种固定钩状木霉孢子制备Cr(VI)还原剂的方法，其特征在于步骤(2)中所述用刀片将PDA切割成细碎的立方体，其体积为2mm×2mm×2mm。

5.根据权利要求1所述的一种固定钩状木霉孢子制备Cr(VI)还原剂的方法，其特征在于步骤(3)中所述的含分生孢子的混合物为固定化基质与孢子悬浮液体积比1:10得到。