[发明专利]用于MicroRNA检测的复合探针组合物及其用途

权利要求书

1.用于MicroRNA检测的复合探针组合物，包括荧光组分和苯基膦组分，

其中，所述的荧光组分为通式I的化合物，所述的苯基膦组分为通式II的化合物：

通式I中：

所述的L_I是-(CH₂)_m-，所述的m为0-8的整数；

所述的F是式F₁的基团，其中，R₃和R₄各自独立地选自氢、C_1-6烷基和苯基；

通式II中：

所述的R₁和R₂各自独立地选自苯基或甲基苯基；

所述的L_II是苯基或-(CH₂)_n-，所述的n为1-8的整数。

2.根据权利要求1所述的复合探针组合物，其特征在于所述的m为0-6的整数。

3.根据权利要求1所述的复合探针组合物，其特征在于，所述的n为1-6的整数。

4.根据权利要求1所述的复合探针组合物，其特征在于：包括式I-LMX和式II-LMX的化合物：

5.一种MicroRNA的检测方法，其特征在于，使用权利要求1所述的复合探针组合物，包括如下步骤：

①基于待测MicroRNA序列，按照沃森-克里克碱基互补配对原则获得互补单链DNA序列；该单链DNA序列的5’端部分序列为DNA_I，3’端部分序列为DNA_II，

②以氨基修饰5’末端后的单链DNA_I与通式I的化合物连接，获得检测分子i；以氨基修饰3’末端后的单链DNA_II与通式II的化合物连接，获得检测分子ii；

③将检测分子i和检测分子ii按摩尔比1:1加入至待测体系中，根据体系荧光变化判定体系中是否含有待检测MicroRNA。

6.根据权利要求5所述的MicroRNA的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

①基于待测MicroRNA序列，按照沃森-克里克碱基互补配对原则获得碱基个数为x的互补单链DNA序列x为18-24的整数；当x为奇数时，所得互补单链DNA序列的5’端至3’端的1至(x-1)/2个碱基组成单链DNA_I，(x+3)/2至x个碱基组成单链DNA_II；当x为偶数时，所得互补序列的5’端至3’端的1至x/2-1个碱基组成单链DNA_I，x/2+1至n个碱基组成单链DNA_II；

②以氨基修饰5’末端后的单链DNA_I与通式I的化合物连接，获得检测分子i；以氨基修饰3’末端后的单链DNA_II与通式II的化合物连接，获得检测分子ii；

③将检测分子i和检测分子ii按摩尔比1:1加入至待测体系中，根据体系荧光变化判定体系中是否含有待检测MicroRNA；体外检测中两者浓度各为1μM，细胞实验中两者各为2μg/mL。

7.根据权利要求5所述的MicroRNA的检测方法，其特征在于，所述的MicroRNA及相应的DNA_I、DNA_II碱基序列分别为：

①待检测MicroRNA具有SEQ ID NO.1的碱基序列，所述的DNA_I和DNA_II分别具有SEQ IDNO.2和SEQ ID NO.3的碱基序列；

②待检测MicroRNA具有SEQ ID NO.4的碱基序列，所述的DNA_I和DNA_II分别具有SEQ IDNO.5和SEQ ID NO.6的碱基序列；

③待检测MicroRNA具有SEQ ID NO.7的碱基序列，所述的DNA_I和DNA_II分别具有SEQ IDNO.8和SEQ ID NO.9的碱基序列。