[发明专利]一种病毒类疫苗种子的深度测序方法

权利要求书

1.一种病毒类疫苗种子的深度测序方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)将待测序样本进行离心，保留上清液；

(2)采用滤膜对步骤(1)得到的所述上清液进行过滤，形成滤过液；

(3)将步骤(2)得到的所述滤过液进行超速离心，除去上清液，保留沉淀；

(4)向步骤(3)得到的所述沉淀中加入纯水或缓冲液，使所述沉淀悬起，再加入酶，混合均匀并反应，形成处理后的样本；

(5)采用酚氯仿抽提法提取步骤(4)得到的所述处理后的样本中的核酸，然后建库，测序。

2.根据权利要求1所述的病毒类疫苗种子的深度测序方法，其特征在于，步骤(1)中，所述离心的转速为4000-15000转/分钟，所述离心的时间为5-90分钟。

3.根据权利要求1所述的病毒类疫苗种子的深度测序方法，其特征在于，步骤(2)中，所述滤膜的孔径为0.22-0.45μm。

4.根据权利要求1所述的病毒类疫苗种子的深度测序方法，其特征在于，步骤(3)中，所述超速离心的转速为20000-800000×g，所述超速离心的时间为2-8小时。

5.根据权利要求1所述的病毒类疫苗种子的深度测序方法，其特征在于，步骤(4)中，所述酶为DNA酶和RNA酶。

6.根据权利要求1所述的病毒类疫苗种子的深度测序方法，其特征在于，步骤(5)中，采用酚氯仿抽提法提取所述处理后的样本中的核酸前，先用Trizol对所述处理后的样本进行处理。

7.根据权利要求6所述的病毒类疫苗种子的深度测序方法，其特征在于，步骤(5)中，向所述处理后的样本中加入Trizol，混匀后室温放置4-6min，加入氯仿，混匀后室温放置2-4min，然后离心；将上层无色水相转移至另外的离心管中，加入异丙醇，室温放置8-12min，然后再次离心8-12min，弃去上清，得到RNA胶样沉淀；用乙醇洗涤所述RNA胶样沉淀，离心后弃上清保留沉淀，室温放置10-15min，干燥，加入DEPC水溶解RNA沉淀即可。

8.根据权利要求7所述的病毒类疫苗种子的深度测序方法，其特征在于，向所述处理后的样本中加入2-4倍体积的Trizol，剧烈震荡15S，并在室温放置5min，每0.75mL所述处理后的样本中加入0.2mL氯仿，剧烈振荡15S，室温放置3min，然后4℃12000×g离心15min使样品分为3层：上层为无色水相，下层为粉红色有机相，中间为白膜层。

9.根据权利要求8所述的病毒类疫苗种子的深度测序方法，其特征在于，所述Trizol的添加量与所述处理后的样本的体积比为3:1。

10.根据权利要求7所述的病毒类疫苗种子的深度测序方法，其特征在于，将上层无色水相转移至DEPC处理过的1.5mL EP管中，每0.75mL所述处理后的样本中加入0.5mL异丙醇，室温放置10min，而后在4℃下，12000×g离心10min，弃去上清，用75％乙醇洗涤RNA胶样沉淀，在4℃下，7500×g离心5min，室温放置10-15min干燥，加入DEPC水溶解RNA沉淀后，-80℃保存。