[发明专利]一种以聚集诱导发光荧光微球为信标载体制备的荧光免疫层析试纸条

权利要求书

1.一种以聚集诱导发光荧光微球为信标载体制备的荧光免疫层析试纸条，包括底板，以及在底板上依次地搭接粘贴的滤纸，样本垫，玻璃纤维垫，硝酸纤维素膜和吸水纸，其特征在于：所述的玻璃纤维垫上喷涂有聚集诱导发光荧光微球标记的抗体复合物，该玻璃纤维垫的制备方法包括如下步骤：

(1)聚集诱导发光荧光微球的制备：将四联苯乙烯酸四甲酯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚马来酸酐十八醇酯溶于三氯甲烷溶剂，四联苯乙烯酸四甲酯溶于三氯甲烷后的浓度为10～100mg/mL，PMMA、PMAO溶于三氯甲烷后的浓度均为10～500mg/mL，之后用质量浓度为0.1～10％的十二烷基硫酸钠溶液作为分散剂分散，在冰浴条件下，将溶液超声制成微乳，将该微乳除去三氯甲烷，离心取沉淀物，清洗沉淀物复溶于缓冲溶液中，即制得制得聚集诱导发光荧光微球；

(2)聚集诱导发光荧光微球标记抗体的制备：向制得的聚集诱导发光荧光微球中加入待标记抗体，再加入EDC，混匀后，4℃反应过夜，之后，加入封闭剂，室温反应2h，离心取沉淀，得到的沉淀复溶，制成聚集诱导发光荧光微球复合物；

(3)聚集诱导发光荧光微球标记抗体的玻璃纤维垫：将制得的聚集诱导发光荧光微球复合物喷涂到玻璃纤维垫上即可。

2.根据权利要求1所述的一种以聚集诱导发光荧光微球为信标载体制备的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述步骤(2)中的聚集诱导发光荧光微球在加入待标记抗体前可进行预处理，预处理的步骤包括：将步骤(1)得到的聚集诱导发光荧光微球超声1～10min，再用0.01～0.5M pH 6.0-8.0的硼酸盐缓冲液调节微球浓度至0.01～0.1mg/mL。

3.根据权利要求1所述的一种以聚集诱导发光荧光微球为信标载体制备的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述步骤(2)中加入待标记抗体后的抗体终浓度为1～100μg/mL，加入对乙基-N，N-二甲基丙基碳二亚胺后其终浓度为0.01～1mg/mL，加入封闭剂后封闭剂的终浓度为0.1～1％，且所述封闭剂选自酪蛋白、牛血清白蛋白、卵清蛋白、聚乙二醇、脱脂牛奶中的任意一种。

4.根据权利要求1所述的一种以聚集诱导发光荧光微球为信标载体制备的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述步骤(2)中加入封闭剂反应后的溶液离心的转速为5000～20000rpm，时间为10～50min。

5.根据权利要求1所述的一种以聚集诱导发光荧光微球为信标载体制备的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述步骤(2)中离心后的沉淀用0.01-0.1M pH 6.0～9.0的磷酸盐缓冲液复溶为起始体积的1倍至1/10倍，即可制成聚集诱导发光荧光微球复合物，并可于4℃保存备用。

6.根据权利要求1所述的一种以聚集诱导发光荧光微球为信标载体制备的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述聚集诱导发光荧光微球标记的抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体、纳米抗体、噬菌体表达抗体。

7.根据权利要求1所述的一种以聚集诱导发光荧光微球为信标载体制备的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上包被有待测物人工偶联抗原或待测物抗体作为检测线，包被有抗鼠抗体或抗兔抗体作为质控线，该硝酸纤维素膜上的制备方法，包括如下步骤：

(1)使用0.01～0.5M pH 6.0～8.0的PBS溶液分别调节包被物待测物人工偶联抗原或待测物抗体、抗鼠抗体或抗兔抗体至浓度为0.01～10.0mg/mL；其中，该待测物抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体、纳米抗体、噬菌体表达抗体；

(2)将调整浓度后的待测物人工偶联抗原或待测物抗体喷涂于硝酸纤维素膜上部，作为检测线，将抗鼠抗体或抗兔抗体喷涂于硝酸纤维素膜下部，作为质控线；其中，检测线和质控线之间间隔一定距离，二者的喷膜量均为0.25～0.74μL/cm；

(3)将喷涂有检测线和质控线的硝酸纤维素膜于37℃过夜烘干处理后，在室温干燥的环境下保存备用。