[发明专利]引物组合在绵羊的种属鉴定和/或绵羊肉鉴定中的应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，特别涉及引物组合在绵羊的种属鉴定和/或绵羊肉鉴定中的应用。本发明筛选到的引物灵敏度高、特异性强，建立的检测方法具有准确率高、检测时间短、结果可实时观测的优点，并且可以只通过短序列的差异，完成绵羊与山羊的区分。从样品处理到报告结果只需1h，操作简单，比其它PCR方法具有更高的特异性。同时，本发明首+次设计、筛选到检测样品中绵羊肉的LAMP引物，并建立了绵羊肉的LAMP检测方法，填补了国内外在此检测领域的空白。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及引物组合在绵羊的种属鉴定和/或绵羊肉鉴定中的应用。

背景技术

羊肉是我们人类优质蛋白质和多种营养素的主要来源，其中绵羊肉因其美味的口感及温补作用而备受广大消费者喜爱。因国内人民生活水品的不断提高，对羊肉的需求量变大，使得一些不法商贩用鸭肉、鼠肉、狐狸肉等作为掺假，充当羊肉售卖，给广大消费者造成了许多不必要的损失。除此之外，还有出现使用山羊肉充当绵羊肉售卖的情况，山羊肉含有一种特殊的脂肪酸，会产生特殊的膻味，口感上逊于绵羊肉。因此，特异、快速、准确鉴定样品中是否存在绵羊肉的核酸DNA具有重要意义。，

对于现今社会而言，传统的依靠感官和经验的肉类形态鉴别方法已经不能满足市场对肉制品掺假现象进行控制监管的需要。目前对肉类产品的鉴定方法主要在蛋白质和核酸水平进行。在蛋白质水平，常用ELISA和高效液相色谱等技术进行检测，其局限性在于对仪器、试剂和样品处理要求高，且检测加工样品时特异性和准确性较差，费时费力。相对来说，检测核酸的方式更方便准确。在核酸水平，常用的核酸水平检测技术有PCR与实时荧光PCR。PCR技术是目前最常用的检测肉源性成分的方法，因为其具有较高的灵敏度、特异性和可操作性。但一般的PCR反应至少1.5h，且后期检测需要使用基因测序和凝胶电泳，而凝胶电泳中的EB具有强致癌性，具有一定的安全隐患。而实时荧光PCR需要昂贵的仪器及试剂，且反应时间至少1.5h，且对操作人员有较高要求，难以在基层得以推广。

目前，国内现阶段并无有效的检测绵羊肉的LAMP引物组及检测方法，更无有效区分绵羊与山羊的LAMP引物组合。因此，提供能够有效检测绵羊肉的LAMP引物组及检测方法具有重要的现实意义。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种引物组合在绵羊的种属鉴定和/或绵羊肉鉴定中的应用。本发明提供一种能够区分基因中短序列差异，从多种肉中准确鉴定出绵羊肉的LAMP引物组合及应用。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了线粒体Cytb基因在绵羊的种属鉴定和/或绵羊肉鉴定中的应用。

此外，本发明还提供了一种标志物，具有如SEQ ID NO:7所示的核苷酸序列。

在此基础上，本发明还提供了具有如SEQ ID NO:7所示序列的核苷酸作为标志物在绵羊的种属鉴定和/或绵羊肉鉴定中的应用。

在上述研究的基础上，本发明还提供了引物组合，包括：引物-F3、引物-B3、引物-FIP、引物-BIP、引物-LF和引物-LB；

所述引物-F3具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：

(I)、具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；

(II)、具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失和/或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；

(III)、与SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列；

(IV)、如(I)、(II)或(III)所示序列的互补序列；

所述引物-B3具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：

(V)、具有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列；