[发明专利]外显子2靶向U7snRNA多核苷酸构建体的重组腺相关病毒递送

说明书

本发明涉及用于治疗由DMD外显子2的复制引起的杜氏肌营养不良症的多核苷酸的重组腺相关病毒(rAAV)递送。本发明提供rAAV产品和使用所述rAAV治疗杜氏肌营养不良症的方法。

本申请为分案申请，其原申请的申请日为2014年4月18日，申请号为201480034373.9，名称为“外显子2靶向U7snRNA多核苷酸构建体的重组腺相关病毒递送”。

本申请要求2013年4月20日提交的美国临时专利申请No.61/814,256的提交日期的权益，所述美国临时专利申请的全部内容以引用的方式并入本文。

发明领域

本发明涉及用于治疗由DMD外显子2的复制引起的杜氏肌营养不良症(DuchenneMuscular Dystrophy)的多核苷酸的重组腺相关病毒(rAAV)递送。本发明提供rAAV产品和使用rAAV治疗杜氏肌营养不良症的方法。

通过引用并入序列表

本申请含有作为公开内容单独部分的计算机可读形式的序列表(文件名：47699PCT_SeqListing.txt；10,162字节–ASCII文本文件，创建于2014年4月18日)，其全部内容以引用的方式并入本文。

背景

肌营养不良症(MD)是一类遗传性疾病。该类疾病的特征在于控制运动的骨骼肌的进行性衰弱和退化。一些形式的MD在婴儿期或儿童期发展，而其它形式可能直到中年或晚年才出现。该病症在肌肉衰弱的分布和程度(一些形式的MD还影响心肌)、发作的年龄、进展速率和遗传模式方面不同。

一种形式的MD是杜氏肌营养不良症(DMD)。它是最普通的严重的儿童形式的肌营养不良症，影响5000名男性新生儿中的1名。DMD由DMD基因的突变引起，所述突变导致骨骼肌和心肌以及GI道和视网膜中肌养蛋白蛋白(427KDa)的缺乏。肌养蛋白不仅保护肌纤维膜免于离心收缩，而且还锚固紧密靠近肌纤维膜的多种信号传导蛋白。DMD的许多临床病例与DMD基因的缺失突变有关联。尽管有许多根据DMD基因的鉴定的研究方向，但治疗选择仍有限。皮质类固醇类为明确有益的，但是随着行走年数的增加，益处被长期副作用抵消。20多年以前报道的原始对照、随机化双盲研究证明使用强的松(prednisone)的益处[Mendell等，N.Engl.J.Med.,320:1592-1597(1989)]。随后的报道显示使用地夫可特(deflazacort)(一种保钠类固醇)的相等功效[Biggar等，J.Pediatr.,138:45-50(2001)]。最近的研究也证明通过外显子跳跃(exon skipping)实现的功效，即在6MWT中延长步行距离。到目前为止公布的临床研究已经报道仅仅其中通过跳过外显子51来修复阅读框的突变的益处[Cirak等，Lancet,378:595-605(2011)和Goemans等，New Engl.J.Med.364:1513-1522(2011)]。在唯一的双盲随机化治疗试验的报道中，使用eteplirsen(一种磷酰二胺吗啉代寡聚物(PMO))证明了有希望的结果。在所有这些外显子跳跃试验中，发现的共同特征是在最初适度改善后行走能力的平稳期。

还参见2012年3月29日公布的美国专利申请公开No.2012/0077860；2013年3月21日公布的2013/0072541；和2013年2月21日公布的2013/0045538。

与缺失突变形成对照，DMD外显子复制造成抗肌萎缩蛋白病(dystrophinopathy)患者的无偏样本中约5％的致病突变[Dent等，Am.J.Med.Genet.,134(3):295-298(2005)]，尽管在一些类型的突变中复制的数目较高[包括由联合抗肌萎缩蛋白病项目(UnitedDystrophinopathy Project)出版的Flanigan等，Hum.Mutat.,30(12):1657-1666(2009)，其中其为11％]。