[发明专利]一种功能增强的通用型CAR-T细胞及其制备方法和用途有效
| 申请号： | 201811634010.5 | 申请日： | 2018-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN109652378B | 公开（公告）日： | 2020-04-24 |
| 发明（设计）人： | 莫文俊;罗敏;李光超;邱玉信;周兆;郭锦涛;丁雯 | 申请（专利权）人： | 广州百暨基因科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/113;C12N15/867;A61K35/17;A61P35/00;A61P35/02;A61P37/02 |
| 代理公司： | 北京市万慧达律师事务所 11111 | 代理人： | 谢敏楠;张孟迪 |
| 地址： | 510000 广东省广州市广州*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 功能 增强 通用型 car 细胞 及其 制备 方法 用途 | ||
1.一种通用型CAR-T细胞，所述通用型CAR-T细胞中同时敲除了T细胞抗原受体TCR的TRBC基因，组织相容性复合体MHC的B2M基因，以及PD1基因；
其中，采用SEQ ID NO:4所示的sgRNA敲除TRBC基因；采用SEQ ID NO:6所示的sgRNA敲除B2M基因；采用SEQ ID NO:11所示的sgRNA敲除PD1基因。
2.根据权利要求1所述的通用型CAR-T细胞，通过CRISPR/Cas9系统的方法进行TCR、B2M和PD1基因的敲除获得通用型CAR-T细胞。
3.根据权利要求1所述的通用型CAR-T细胞，所述CAR靶向CD19。
4.根据权利要求3所述的通用型CAR-T细胞，所述的CAR具有SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列，或者SEQ ID NO:17所示的核酸序列。
5.权利要求1-4任一所述的通用型CAR-T细胞制备方法，其包括以下步骤：
1)得到活化的T细胞；
2)用编码靶向CD19的CAR的慢病毒载体来转染步骤1)的T细胞，获得靶向不同疾病分子的CAR-T细胞；所述靶向CD19的CAR具有SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列；
3)将步骤2)获得的CAR-T细胞通过CRISPR/Cas9系统的方法进行TCR、B2M和PD1基因的敲除获得通用型CAR-T细胞；
其中，步骤2)和3)顺序可互换或同时进行。
6.权利要求1-4任一所述通用型CAR-T细胞，或者权利要求5所述方法在制备治疗B细胞系恶性肿瘤的药物中的应用。
7.根据权利要求6所述应用，所述的B细胞系恶性肿瘤选自非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、急性淋巴细胞白血病或多发性骨髓瘤。
8.一种药物组合物，所述的药物组合物包含权利要求1-4任一所述的通用型CAR-T细胞。
9.根据权利要求8所述药物组合物，所述的药物组合物还包括药学上可接受的载体。
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