[发明专利]一种从脂肪抽吸物中高效分离脂肪间充质干细胞的方法

说明书

本发明涉及一种从脂肪抽吸物中高效分离脂肪间充质干细胞的方法，包括以下步骤：步骤1：前脂肪细胞获取，在脂肪组织中加入胶原酶溶液，震荡得到混合液，在所述混合液中加入培养基，得到二次混合液，对所述二次混合液进行离心，收集底部细胞得到前脂肪细胞；步骤2：脂肪间充质干细胞的获得，使用培养基对所述步骤1得到的所述前脂肪细胞进行重新悬浮得到细胞重悬液，对所述细胞重悬液进行过滤去除杂质，得到含有脂肪间充质干细胞溶液，并对单位体积的所述含有脂肪间充质干细胞溶液中的细胞个数进行测定。提供了一种取材简便，步骤量化，具有较高重复性的从脂肪中分离脂肪间充质干细胞的方法。

技术领域

本发明涉及生物细胞分离技术领域，具体涉及一种从脂肪抽吸物中高效分离脂肪间充质干细胞的方法。

背景技术

吸脂手术后的脂肪抽吸物是医疗废弃物。术后需要作为医疗垃圾统一处理。然而其内具有大量的脂肪干细胞被一同丢弃。脂肪抽吸物中储备了大量的脂肪来源干细胞(ADSC)，和骨髓间充质干细胞等人体其它组织来源干细胞一样，ADSC在组织再生和组织修复过程中发挥了重要功能。ADSC的角色既可以是种子细胞，由干细胞分化为组织再生和修复所需的成熟细胞(例如分化为脂肪细胞)，也可以是诱导剂，通过旁分泌功能抑制周围炎症反应、促进组织血管再生。利用ADSC的上述功能，有望为修复软组织缺损提供一种新的治疗途径。

脂肪间充质干细胞获取过程目前主要还是通过胶原酶酶消化,裂解法裂解红细胞等手段来进行。分离过程复杂繁琐、成本高，且并无统一操作标准，造成脂肪间充质干细胞获取效率低，可重复性差，所得脂肪间充质干细胞状态性差。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种取材简便，步骤量化，具有较高重复性的从脂肪中分离脂肪间充质干细胞的方法。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种从脂肪抽吸物中高效分离脂肪间充质干细胞的方法，包括以下步骤：

步骤1：前脂肪细胞获取，在脂肪组织中加入胶原酶溶液，震荡得到混合液，在所述混合液中加入培养基，得到二次混合液，对所述二次混合液进行离心，收集底部细胞得到前脂肪细胞；

步骤2：脂肪间充质干细胞的获得，使用培养基对所述步骤1得到的所述前脂肪细胞进行重新悬浮得到细胞重悬液，对所述细胞重悬液进行过滤去除杂质，得到含有脂肪间充质干细胞溶液，并对单位体积的所述细胞溶液中的细胞个数进行测定。

本发明的有益效果是：在于脂肪间充质干细胞获取率高；脂肪间充质干细胞状态良好、稳定性良好,具有多向分化能力；操作方法简单易行、可重复性强。

在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进：

进一步，所述步骤1中所述胶原酶溶液的加入体积与所述脂肪组织的体积相同，所述步骤1加入的培养基体积与所述脂肪组织的体积相同。

采用上述进一步方案的有益效果是利用胶原酶对细胞进行消化，用培养基对细胞进行中和胶原酶，防止消化过度，合适的胶原酶和培养基的用量在保证消化作用和中和作用的前提下，不会造成试剂的浪费。

进一步，所述步骤1中通过摇床进行震荡混合，所述摇床设定温度为37℃，设定速率为100rmp，震荡时间为60min，所述步骤1中的离心的离心速率为1200rmp，离心时间为10min。

采用上述进一步方案的有益效果是设置合适的温度使细胞在适宜的温度条件下繁殖，保持细胞活性，震荡速率过大则使细胞不稳定，速率过小则起不到震荡的效果，合适的震荡速率既能保证震荡效果，又能保证细胞的稳定性，合适的离心速率既能达到分离的效果，又能保证细胞活性不受损害，离心速率太小达不到分离的效果，离心速率太大，使得细胞由于离心力过大而造成细胞的死亡，合适的离心速率既能保证细胞活性，又能保证离心效果，合适的离心和震荡时间在保证离心和震荡效果的前提下，节约时间和设备。