[发明专利]针对HDAC6-cat1区域的纳米抗体及其应用

说明书

本发明公开了针对HDAC6‑cat1区域的纳米抗体及其应用，具体涉及针对组蛋白脱乙酰基酶6过氧化氢酶1区域（HDAC6‑cat1）区域的纳米抗体及其应用，公开了其VHH链的框架区FR和互补决定区CDR的氨基酸序列，同时还公布了编码该重链纳米抗体的基因序列以及其表达纳米抗体的宿主细胞。通过本发明所公布的单域重链纳米抗体基因序列及宿主细胞，该纳米抗体能够在大肠杆菌内高效表达，该纳米抗体经表达纯化后可与目标抗原进行识别及特异性鉴定，并可用于目标抗原的表位的分析。同时构建了pcDNA5/FRT重组质粒，以此来探究该纳米抗体对组蛋白脱乙酰基酶6(HDAC6)生物学功能的影响。

技术领域

本发明涉及生物技术或生物医学领域，涉及针对HDAC6-cat1区域的纳米抗体及其应用。

背景技术

抗体(Ab)，也称为免疫球蛋白(Ig)，是主要由免疫系统用于中和致病菌和病毒等病原体的浆细胞产生的大型Y型蛋白质。抗体由适应性免疫系统的B细胞分泌，大部分由称为浆细胞的分化B细胞分泌，属于免疫球蛋白超家族的糖蛋白，它们构成血液蛋白质的大部分γ球蛋白部分。我们目前最常用的是IgG型抗体，这类抗体在人体内也是含量最高的抗体，约9.5-12.5g/L。常规抗体通常由两条大的重链和两条小的轻链构成，重链与轻链之间通过二硫键结合形成对称的Y型抗体。由于抗体可以高效地与体内和体外各种抗原特异性结合，使得抗体不仅应用于调节免疫系统方面，还能够用作医学治疗的生物工具和医学诊断方面的高灵敏的检测工具。目前，抗体药物的开发是生物技术药物研发的重要组成部分，抗体试剂的应用也是生物学实验中最常用的研究方法。因此，抗体相关产品的开发具有很大的应用前景和商业价值。

组蛋白脱乙酰基酶6(HDAC6)是组蛋白去乙酰化酶家族中的一员。区别于其他家族成员，HDAC6具有两个串联的催化活性结构域，并且在细胞质滞留信号(SE14)和核输出信号(NES)的作用下，HDAC6主要定位在胞浆中。HDAC6具有非组蛋白的底物特异性，可以催化多种胞质蛋白的去乙酰化反应，具有重要的生理功能。HDAC6表达或活性的异常与许多疾病的发生相关。针对HDAC6的研究集中在HDAC6催化区域晶体结构的解析及HDAC6选择性抑制剂的研究上，有研究已对HDAC6催化区域的晶体结构进行了解析，目前开发出针对HDAC6的选择性抑制剂，都是一些小分子化学类药物，抗体类药物还未见报道。

研究表明，骆驼的血液中存在一种天然缺失轻链只含重链的抗体，称为重链抗体。克隆重链抗体的可变区可得到只由一个重链可变区组成的单域抗体，称为VHH抗体。VHH抗体的晶体直径仅有2.5nm，长4nm，因此又被称为纳米抗体(Nanobody)。纳米抗体的大小约为12-15KDa，只有传统IgG型抗体的十分之一，是天然存在的可与抗原结合的最小片段。纳米抗体因其独特的结构特征和特性，相比于小分子药物特异性更高。相比于单抗类药物研发周期长，生产成本高，易降解等难题。纳米抗体具有良好的环境耐受性，稳定性高，易表达，分子量小，组织渗透性高等特性，使其具备更好的临床应用效果，在生物医疗应用方面具有很好的发展前景。

发明内容

为了解决现有技术中缺少针对HDAC6的选择性抑制剂(抗体类药物)的问题，本发明制备并筛选出能识别HDAC6的特异性纳米抗体，基于纳米抗体相对于普通抗体的优势，为HDAC6在药物开发及疾病治疗领域提供有效的理论支持。

为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：针对HDAC6-cat1区域的纳米抗体，所述的纳米抗体的序列包括互补决定区CDR；所述互补决定区CDR包括CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列；

所述的纳米抗体的互补决定区CDR的序列包括下述(1)-(16)中的至少一种：

(1)SEQ ID NO:5所示CDR1，SEQ ID NO:6所示CDR2，SEQ ID NO:7所示CDR3；

(2)SEQ ID NO:11所示CDR1，SEQ ID NO:12所示CDR2，SEQ ID NO:13所示CDR3；