[发明专利]幽门螺旋杆菌噬菌体裂解酶及其制备方法

权利要求书

1.一种包含聚阳离子九肽的幽门螺旋杆菌噬菌体裂解酶的蛋白，其特征在于，核苷酸序列为Seq ID No.1，氨基酸序列为Seq ID No.2。

2.一种包含疏水小肽的幽门螺旋杆菌噬菌体裂解酶的蛋白，其特征在于，核苷酸序列为SeqIDNo.3，氨基酸序列为Seq ID No.4。

3.一种可溶型表达载体pSUMO，其特征在于，包含权利要求1所述的核苷酸序列。

4.如权利要求3所述的表达载体，其特征在于，包含聚阳离子九肽的幽门螺旋杆菌噬菌体裂解酶的基因序列Seq ID No.1插入质粒pSUMO的SacI/XhoI酶切位点。

5.一种可溶型表达载体pSUMO，其特征在于，包含权利要求2所述的核苷酸序列。

6.如权利要求5所述的表达载体，其特征在于，包含疏水小肽的幽门螺旋杆菌噬菌体裂解酶的基因序列Seq ID No.2插入质粒pSUMO的SacI/XhoI酶切位点。

7.一种包含聚阳离子九肽的幽门螺旋杆菌噬菌体裂解酶的工程菌，其特征在于，由将权利要求4所述的表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)而获得。

8.一种包含疏水小肽的幽门螺旋杆菌噬菌体裂解酶的工程菌，其特征在于，由将权利要求6所述的表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)而获得。

9.一种幽门螺旋杆菌噬菌体裂解酶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)培养权利要求7或8任一所述的幽门螺旋杆菌噬菌体裂解酶工程菌并诱导幽门螺旋杆菌噬菌体裂解酶基因的表达；

(2)收集菌体；

(3)破碎菌体；

(4)收集上清；

(5)纯化上清中幽门螺旋杆菌噬菌体裂解酶和SUMO融合蛋白；

(6)幽门螺旋杆菌噬菌体裂解酶活化；

(7)活化的幽门螺旋杆菌噬菌体裂解酶纯化。

10.如权利要求9所述的幽门螺旋杆菌噬菌体裂解酶的制备方法，其特征在于，

将前述表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)的转化方法为电穿孔法或CaCL₂转化法；

所述步骤(1)中，在诱导表达过程中，使用浓度为0.lmM至10mM的IPTG，在25℃温度下进行诱导，使得目的蛋白可以获得的表达；

所述步骤(3)中，破碎菌体的方法包括高压匀浆、渗透压冲击、冻融或超声波破碎；

所述步骤(5)中，纯化步骤是采用Ni²⁺-NTA基质，并通过梯度为20mM至250mM的咪唑溶液洗脱带有组氨酸标签的包含SUMO-聚阳离子九肽幽门螺旋杆菌噬菌体裂解酶融合蛋白和SUMO-疏水小肽幽门螺旋杆菌噬菌体裂解酶融合蛋白；

所述步骤(6)中，SUMO-聚阳离子九肽幽门螺旋杆菌噬菌体裂解酶融合蛋白活化包括所述SUMO-聚阳离子九肽幽门螺旋杆菌噬菌体裂解酶融合蛋白经肠激酶在室温下酶解1-10小时后即可得到具有活性的聚阳离子九肽幽门螺旋杆菌噬菌体裂解酶；

所述步骤(6)中，SUMO-疏水小肽幽门螺旋杆菌噬菌体裂解酶融合蛋白的活化包括所述SUMO-疏水小肽幽门螺旋杆菌噬菌体裂解酶融合蛋白经肠激酶在室温下酶解1-10小时后即可得到具有活性的疏水小肽幽门螺旋杆菌噬菌体裂解酶；

所述步骤(7)中，纯化步骤包括离子交换层析。