[发明专利]一种检测心血管疾病用药基因的试剂盒及检测方法

说明书

本发明属于基因检测技术领域，涉及一种检测心血管疾病用药基因的试剂盒及检测方法，试剂盒包括11种基因17个突变位点的检测试剂，针对11种基因出现的异常的基因变异位点，设计每个位点的扩增引物和单碱基延伸引物，通过多重PCR和多重单碱基延伸反应，进而进行质谱分析其特异性的产物，判定每一个位点的基因型，其检测特异性强、灵敏度高，可应用于科研、药物疗效研究、心血管疾病相关调查、以及心血管临床用药指导。

技术领域

本发明属于基因检测技术领域，涉及一种检测心血管疾病用药基因的试剂盒，具体涉及 人类样本中心血管疾病用药相关的11种基因17个突变位点的检测。针对十一种基因出现的 异常的基因变异位点，设计每个位点的扩增引物和单碱基延伸引物，通过多重PCR和多重单 碱基延伸反应，进而进行质谱分析其特异性的产物，判定每一个位点的基因型。

背景技术

心血管疾病严重威胁着中国人的健康，具有患者基数大，死亡率高的特点。根据《中国 心血管病报告2017》数据，我国心血管疾病患者约有2.9亿人，其中脑卒中1300万人，冠 心病1100万人，心力衰竭450万人，先天性心脏病200万人，高血压2.7亿人。心血管疾病是居民因病死亡的首要因素，占居民疾病死亡总数的40％以上，高于肿瘤及其他疾病致死人 数。而在心血管临床治疗过程中发现，不同的心血管疾病患者对于药物治疗存在明显差异。 导致个体差异的原因有很多，而遗传因素是引起个体差异的重要原因。

临床用药经历了经验用药阶段，询证用药阶段，到现在逐渐发展为个性化用药阶段。药 物基因组学正是通过研究药物代谢酶基因、药物受体基因、药物转运蛋白基因等影响药物作 用的遗传因素，阐明不同基因型对药物药效和毒性的不同反应，进而为携带不同基因型的个 体临床用药提供指导。通过差异化的用药指导，可以降低患者不良心血管事件发生的风险， 以期达到“精准医疗”、“个性化用药”、“合理用药”的目标。

心血管疾病药物基因组学是当前热点领域。一些主要的基因变异对华法林、氯吡格雷、 硝酸甘油、高血压治疗相关、他汀类等药物的代谢、药动学、药效学有重要影响。许多基因 变异由全基因组关联性研究发现，并经大型临床队列研究或随机对照研究验证，具有比较明 确的循证医学证据。

华法林是香豆素类抗凝剂的一种，主要用于血栓栓塞性疾病的防治。华法林在临床上较 为常用，但是其治疗窗窄、个体用药差异大，血药浓度过高或敏感性增加可导致严重出血事 件，因此使用准确的剂量对于患者安全而言至关重要。氯吡格雷是一种抗血小板药物，广泛 用于急性冠脉综合征、缺血性脑血栓、闭塞性脉管炎和动脉硬化及血栓栓塞引起的并发症。 心脏支架手术后的患者需长期服用氯吡格雷以防止支架内再梗。氯吡格雷主要经CYP2C19代 谢活化后发挥抗血小板效应。氯吡格雷对血小板聚集的抑制作用存在很大的个体差异，血小 板抑制程度不足增加主要不良心血管事件风险，而过度抑制可增加出血风险。诸多证据表明 CYP2C19基因型与接受氯吡格雷治疗的冠心病患者的临床终点事件有相关性。自2009年《新 英格兰医学杂志》等权威杂志发表了包括全基因组关联性研究在内的多篇文章，研究结果表 明氯吡格雷活化关键酶基因CYP2C19*2功能性等位基因丢失影响抗血小板效应和心血管不良 事件发生率。基于此，美国FDA在2010年3月发布了氯吡格雷抵抗的“黑框警告”：应用氯 吡格雷后出现主要心血管不良事件与CYP2C19无功能的等位基因有关。氯吡格雷在体内先是 转化成无活性的二氧基氯吡格雷，再经第二步转化成活性产物，CYP3A4/5、CYP2C19、CYP2B6 和CYP2B9等酶可能参与其代谢过程。其中，除CYP2C19酶在代谢中的作用得到明确证实外， 其余3种酶对氯吡格雷的活化是否有影响尚缺乏明确的理论依据。CYP2C19基因多态性较复 杂，其中*1为野生型，携带者酶功能正常，属于快代谢型；CYP2C19*2、*3、*4、*5、*6、 *7、*8为缺失型，携带者酶功能异常，属于慢代谢型；CYP2C19*17可增加酶的表达量，属于 超快代谢型。携带上述任何2个慢代谢型等位基因的患者服用氯吡格雷后，体内活性代谢产 物的血浆浓度较低，血小板抑制率也较低，主要心血管不良事件发生率将明显增加。