[发明专利]枣果中环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷的提取方法

权利要求书

1.一种枣果中环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷的制备方法，其特征在于：该制备方法按以下步骤顺序进行：

（1）制备枣粗提物

将枣果，去核，粉碎得枣粉末，将枣粉末按枣粉末与提取溶剂重量体积比1：6~10的比例加入提取溶剂中，进行加热加压提取15~30 min或加热回流提取1~2 h，提取温度为70℃~90℃，重复提取2~3次，合并提取液，减压浓缩，回收有机溶剂，得枣粗提物；

（2）醇沉

将步骤（1）中枣粗提物加入60%~80%乙醇水溶液中，2℃~8℃静置24~48 h，过滤，上清液减压浓缩，得环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷粗提取物；

（3）大孔树脂层析柱分离

将步骤（2）的环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷粗提取物加入大孔树脂层析柱中，上样量与分离材料体积比1：100~500，分离步骤为：首先用纯水洗至层析柱无色，再用2~5个柱体积的洗脱液洗脱，流速1~3个柱体积/小时，收集洗脱液，得到环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷混合提取物；

（4）膜分离

将步骤（3）中的环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷混合提取物，采用纳滤膜过滤，上清液减压浓缩，回收有机溶剂，得环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷混合组分；

（5）制备液相色谱分离

将（4）环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷混合组分经制备液相色谱仪分离，分别收集环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷组分，分别得到环磷酸腺苷制备组分和环磷酸鸟苷制备组分。

2.根据权利要求1所述枣果中环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中，提取溶剂为0~30%乙醇或甲醇水溶液。

3.根据权利要求1所述枣果中环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷的制备方法，其特征在于：所述有机溶剂为乙醇或甲醇。

4.根据权利要求1所述枣果中环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中，洗脱液为含有0.1 %~1%甲酸或乙酸的20 %~40 %乙醇或甲醇水溶液。

5.根据权利要求1所述枣果中环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中，大孔树脂为HPD722弱极性大孔吸附树脂。

6.根据权利要求1所述枣果中环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷的制备方法，其特征在于：所述步骤（4）中纳滤膜的材质为聚砜、聚醚砜或芳香聚酰胺，截流分子量为500，工作压力为0.4~0.7 MPa，温度为20~45 ℃，pH为2~6。

7.根据权利要求1所述枣果中环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷的制备方法，其特征在于：步骤（5）中制备液相色谱的分离条件为以粒径5~10 μm的C18硅胶键合固定相为色谱填料，以甲醇和0.1 %甲酸水溶液为流动相，10~20%甲醇等度洗脱，色谱柱效为3000~10000塔板/米，色谱柱长为100 mm~500 mm，色谱柱内径为20 mm~200 mm。