[发明专利]一种新的甘氨酸含量的检测方法在审
申请号: | 201811635412.7 | 申请日: | 2018-12-29 |
公开(公告)号: | CN109633011A | 公开(公告)日: | 2019-04-16 |
发明(设计)人: | 娄良;楼秋霞;郭然;吴黎雄;张和平 | 申请(专利权)人: | 中山百灵生物技术有限公司 |
主分类号: | G01N30/02 | 分类号: | G01N30/02;G01N30/06 |
代理公司: | 中山市兴华粤专利代理有限公司 44345 | 代理人: | 吴剑锋 |
地址: | 528400 广东*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 甘氨酸 对照品溶液 对照品 稀释剂 供试品溶液 检测 溶解 工业化大生产 计算供试品 检测器检测 液相色谱仪 中间反应 大极性 对数法 灵敏度 色谱图 小分子 监控 记录 | ||
1.一种新的甘氨酸含量的检测方法,其特征在于包括以下步骤:
A、取甘氨酸对照品用稀释剂溶解成浓度为0.2mg/ml、1.0mg/ml的对照品溶液,取甘氨酸样品用稀释剂溶解为浓度为0.1~1.0mg/ml的对照品供试品溶液;
B、分别取浓度为0.2mg/ml的对照品溶液、浓度为1.0mg/ml的对照品溶液和度为0.1~1.0mg/ml的对照品供试品溶液,各20ul注入液相色谱仪中,采用ELSD检测器检测,记录色谱图中甘氨酸的峰面积,按照外标两点对数法,计算供试品中甘氨酸的含量。
2.根据权利要求1所述的一种新的甘氨酸含量的检测方法,其特征在于步骤B的液相色谱仪中流动相A为pH值4.0,浓度为0.02mol/L的甲酸铵水溶液,流动相B为乙腈。
3.根据权利要求2所述的一种新的甘氨酸含量的检测方法,其特征在于步骤B中以流动相A与流动相B进行梯度洗脱,所述梯度为:
4.根据权利要求2所述的一种新的甘氨酸含量的检测方法,其特征在于步骤B中液相色谱仪中采用HILIC亲水色谱柱,流速:0.6-1ml/min,柱温:30-50℃,漂移管温度:40-60℃。
5.根据权利要求4所述的一种新的甘氨酸含量的检测方法,其特征在于所述流速:0.8ml/min,柱温:40℃,漂移管温度:50℃。
6.根据权利要求2所述的一种新的甘氨酸含量的检测方法,其特征在于所述的稀释剂为甲酸铵水溶液与乙腈按体积比1-5:5-9的混合物,其中甲酸铵水溶液pH值4.0,浓度为0.02mol/L。
7.根据权利要求2或6所述的一种新的甘氨酸含量的检测方法,其特征在于采用甲酸调pH值。
8.根据权利要求1或所述的一种新的甘氨酸含量的检测方法,其特征在于还包括有系统适应性测定,其中系统适应性有关物质为丙氨酸;
分别取约25mg甘氨酸对照品、丙氨酸对照品用稀释剂溶解,摇匀并定容到50ml,作为系统适用性溶液;
取系统适用性溶液20ul注入液相色谱仪,记录色谱图各峰的分离度和理论塔板数,分离度的大小要不小于1.5,理论踏板数不小于2000。
9.根据权利要求1或所述的一种新的甘氨酸含量的检测方法,其特征在于步骤A中取甘氨酸样品用稀释剂溶解为浓度为0.5mg/ml的对照品供试品溶液。
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