[发明专利]一种环糊精糖基转移酶在生产α-糖基橙皮苷中的应用

权利要求书

1.一种源自热硫嗜热厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumthermosulfurigenes)的环糊精糖基转移酶在生产α-糖基橙皮苷中的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述环糊精糖基转移酶氨基酸序列为SEQ IDNO.2所示。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述环糊精糖基转移酶编码基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述的应用以含环糊精糖基转移酶编码基因的工程菌经发酵培养获得的发酵液经破碎后的混合液为菌剂，以橙皮苷和糊精为底物，以水为反应介质构成转化体系，在pH值5.0-8.0、65-85℃条件下进行转化反应，反应完全后，将反应液分离纯化，获得α-糖基橙皮苷；所述橙皮苷先溶于1mol/L NaOH水溶液中制成溶液后加入转化体系。

5.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述转化体系中，橙皮苷加入的质量浓度为20-150g/L，所述糊精加入的质量浓度为100-500g/L；所述菌剂用量以破碎前发酵液中湿菌体重量计，所述转化体系中湿菌体含量为5-30g/L；所述NaOH水溶液体积用量以橙皮苷质量计为2-20ml/g。

6.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述反应优选在pH值6.0、75℃条件下进行转化反应。

7.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述菌剂按如下方法制备：将含环糊精糖基转移酶编码基因的工程菌接种到含卡那霉素100μg/mL发酵培养基中，30-37℃培养4-6h；再加入终浓度为5.6-7.0mM的α-乳糖，补加30g/L的甘油，22-25℃继续发酵12-18h，取发酵液，高压破碎，取混合液即得到生产α-橙皮苷的菌剂；所述发酵培养基组成：12g/L蛋白胨、10g/L酵母粉、Na₂HPO₄·12H₂O 8.9g/L、KH₂PO₄ 3.4g/L、NH₄Cl 2.67g/L、Na₂SO₄ 0.71g/L、MgSO₄·7H₂O 0.3g/L，溶剂为去离子水，pH7.0。

8.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述工程菌在发酵前先进行种子活化培养，再将种子液以体积浓度1-5％的接种量接种至发酵培养基，所述种子活化培养为：将含环糊精糖基转移酶编码基因的工程菌接种在含有35μg/ml氯霉素和100μg/ml卡那霉素的LB液体培养基中，37℃培养至对数生长中期，获得种子液；所述LB液体培养基组成：酵母粉5.0g/L、蛋白胨10.0g/L、NaCl 10.0g/L，溶剂为去离子水，pH值自然。