[发明专利]凝血因子Ⅹ激活剂RVV-Ⅹ的制备方法及制得的RVV-Ⅹ有效
| 申请号： | 201811636120.5 | 申请日： | 2018-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN109652398B | 公开（公告）日： | 2021-07-20 |
| 发明（设计）人： | 谢永华;李存存 | 申请（专利权）人： | 上海太阳生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/64 | 分类号： | C12N9/64 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 刘伟;赵青朵 |
| 地址： | 201108 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 凝血 因子 激活剂 rvv 制备 方法 | ||
【权利要求书】：
1.凝血因子Ⅹ激活剂RVV-Ⅹ的制备方法，包括如下步骤：
1）缓冲液平衡分子筛层析柱，圆斑蝰蛇毒溶于缓冲液后离心取上清，经分子筛层析柱分离，缓冲液0.2 mL/min流速洗脱，用核酸蛋白检测仪监测，根据A280nm值绘出洗脱线，采用发色底物法检测确定具有RVV-Ⅹ活性的洗脱峰，收集浓缩；所述分子筛层析柱的填料为Superdex 200、Sephacryl S-100 HR或Ultrogel® ACA 44；所述缓冲液为0.05 mol/L pH7.4的TRIS-HCl缓冲液；
2）缓冲液平衡弱阳离子柱，将步骤1）活性峰浓缩液，采用弱阳离子柱进行分离，先用缓冲液洗脱至基线平稳，然后用含0-0.5mol/L NaCl的缓冲液梯度洗脱，流速为0.5mL/min，用核酸蛋白检测仪监测，根据A280nm值绘出洗脱线，采用发色底物法检测收集含0.2 mol/LNaCl缓冲液洗脱的洗脱液峰和/或含0.3 mol/L NaCl的缓冲液洗脱的洗脱液峰；所述缓冲液为0.05 mol /L、pH 5.8乙酸铵缓冲液；
所述弱阳离子柱的填料为CM Sepharose Fast Flow。
2.根据权利要求1所述的制备方法，步骤2）所述NaCl的浓度洗脱梯度为0.1 mol/L、0.2mol/L、0.3 mol/L、0.5 mol/L。
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