[发明专利]一种提高N-乙酰神经氨酸水溶液稳定性的方法及其应用

说明书

本发明提供了一种提高N‑乙酰神经氨酸水溶液稳定性的方法及其应用。该方法包括如下步骤：将含有N‑乙酰神经氨酸的水溶液的pH调至5～9；所述N‑乙酰神经氨酸由发酵制得。本发明采用调节由发酵制得的N‑乙酰神经氨酸的水溶液pH值的方法以增强N‑乙酰神经氨酸水溶液的稳定性。实验证明此方法可有效提高N‑乙酰神经氨酸水溶液稳定性，且操作简单。

技术领域

本发明涉及工业化生产领域，更具体地，涉及一种提高N-乙酰神经氨酸水溶液稳定性的方法及其应用。

背景技术

N-乙酰神经氨酸是一种含9个碳原子并具有吡喃糖结构的酸性氨基糖，具有调节Ig G抗炎活性，增强和促进婴儿免疫力和大脑发育，影响神经细胞的完整性、渗透性及活性的作用，参与细胞识别、信号转导、肿瘤发生、受精等多个生理过程，可被应用于食品、化妆品、药品领域。

在工业上，N-乙酰神经氨酸通常是通过发酵法制得，发酵后对发酵液进行一系列的后处理得到N-乙酰神经氨酸，专利一种从微生物发酵液中分离提纯和喷雾干燥制备N-乙酰神经氨酸干粉的方法，解决了N-乙酰神经氨酸因成本较高而无法在化妆品中普遍应用的问题，提供一种从微生物发酵液中分离提纯和喷雾干燥制备N-乙酰神经氨酸干粉的方法，降低了N-乙酰神经氨酸的生产成本，并获得质量稳定的N-乙酰神经氨酸，满足了化妆品领域的应用需求。但是该方法得到的N-乙酰神经氨酸含有一定量的杂质，得到的N-乙酰神经氨酸的水溶液的稳定性较差，当将该N-乙酰神经氨酸溶于水后再进行高温杀菌处理时会有大量的N-乙酰神经氨酸损失，或当该N-乙酰神经氨酸溶于水后常温下用0.22um膜进行除菌处理，再进行室温(25℃)长期放置在放置时也会出现明显的N-乙酰神经氨酸损失。在现有技术中，缺乏一种简单且有效地手段来提高该类N-乙酰神经氨酸的稳定性。

发明内容

针对上述问题，本发明的第一目的在于提供一种N-乙酰神经氨酸水溶液稳定性的方法，该方法包括如下步骤：

将含有N-乙酰神经氨酸的水溶液的pH调至5～9；

所述N-乙酰神经氨酸由发酵制得。

本发明采用调节由发酵制得的N-乙酰神经氨酸的水溶液pH值的方法以增强N-乙酰神经氨酸水溶液的稳定性。实验证明此方法可有效提高N-乙酰神经氨酸水溶液稳定性，且操作简单。

在本发明一个优选实施方式中，所述pH为5～7，优选为7。

在本发明一个优选实施方式中，所述含有N-乙酰神经氨酸的水溶液中N-乙酰神经氨酸的浓度为5g/L～100g/L，优选为5g/L～50g/L。

在本发明一个优选实施方式中，所述N-乙酰神经氨酸为由发酵制得的干粉，在所述干粉中，纯N-乙酰神经氨酸的含量在90％以上。在工业上，由发酵制得的N-乙酰神经氨酸干粉中纯的N-乙酰神经氨酸的含量均达不到100％。本发明的方法尤其适用于发酵制得的N-乙酰神经氨酸干粉，其中，纯N-乙酰神经氨酸的含量在90％到100％之间。

在本发明一个优选实施方式中，所述发酵具体为大肠杆菌工程菌通过微生物发酵法得到的发酵液，除去菌体、杂蛋白，进行脱色和除盐，浓缩后喷雾干燥。

其中，所述大肠杆菌工程菌为将6-磷酸葡萄糖胺乙酰化酶基因、N-乙酰葡萄糖胺-2-异构酶基因、N-乙酰神经氨酸合成酶基因和6-磷酸葡萄糖胺脱氨酶基因导入大肠杆菌表达构建而成的重组大肠杆菌。更优选地是，大肠杆菌工程菌为CN201310600843.0中所公开的大肠杆菌工程菌，优选为CN201310600843.0中实施例1中所公开的大肠杆菌工程菌。

其中，“除去菌体、杂蛋白，进行脱色和除盐，浓缩后喷雾干燥”优选使用CN201610003300.4中所公开的分离提纯和喷雾干燥的方法，优选使用CN201610003300.4的实施例1中所公开的分离提纯和喷雾干燥的方法去发酵液进行除去菌体、杂蛋白，进行脱色和除盐，浓缩后喷雾干燥。