[发明专利]试剂和吸附柱在制备用于检测干血片样本中的待检测物的试剂盒中的用途有效
| 申请号： | 201811639542.8 | 申请日： | 2018-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN109709248B | 公开（公告）日： | 2020-10-27 |
| 发明（设计）人： | 崔佳奕;田亚平;张春燕;蒋涛;程昱璇;朱永阑;舒杨;檀旭东;桑培培;史文杰;张民杰 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军总医院 |
| 主分类号： | G01N30/72 | 分类号： | G01N30/72;G01N30/14;C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 北京北汇律师事务所 11711 | 代理人： | 李英杰 |
| 地址： | 100853*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 试剂 吸附 制备 用于 检测 干血片 样本 中的 试剂盒 用途 | ||
【权利要求书】：
1.试剂和吸附柱在制备用于检测干血片样本中的待检测物的试剂盒中的用途，其中，所述试剂为(a)含甲醇、13C6-Phe同位素内标及琥珀酰丙酮的溶液、(b)含10mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、1 mM乙二胺四乙酸钠的水溶液和(c)酚氯仿；所述检测包括以下步骤：
(1) 从所述干血片样本得到的一个血斑中分离代谢产物的步骤，其包括使用含甲醇、13C6-Phe同位素内标及琥珀酰丙酮的溶液在40-50℃下振荡处理所述一个血斑30-60分钟，并经分离得到第一上清液和沉淀物，其中，所述干血片样本是指在样本收集位点收集的一滴静脉血或末梢血滴加至干血片后得到的样本，所述血斑是指用直径为3.2mm的打孔器在干血斑的中央位置进行打孔得到的血斑；
(2) 使用含10 mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、1 mM 乙二胺四乙酸钠的水溶液处理所述沉淀物，之后添加酚氯仿混合液进一步处理，经离心后得到第二上清液；
(3) 利用吸附柱从所述第二上清液中纯化遗传物质，得到分离的遗传物质的步骤；
(4) 利用串联质谱分析所述第一上清液中的苯丙氨酸的步骤；和
(5) 利用所述遗传物质构建二代测序文库的步骤，其包括利用二代测序结果检测PAH基因第158位的G碱基是否突变为A碱基，及PAH基因的第611位点的A碱基是否突变为G碱基。
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