[发明专利]用于检测革兰氏阴性菌和/或革兰氏阴性菌耐药性的核酸试剂、试剂盒、系统及方法

说明书

本公开涉及一种用于检测革兰氏阴性菌和/或革兰氏阴性菌耐药性的核酸试剂、试剂盒、系统及方法，所述核酸试剂包括分别彼此独立存放或互相任意混合存放的SEQ ID NO.1‑60所示的引物和SEQ ID NO.63‑92所示的探针。本公开通过以上所述的引物和探针建立了检测肺炎克雷伯、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、阴沟杆菌、粘质沙雷菌、鲍曼不动杆菌等6种病原体及其携带的常见24种耐药基因的核酸试剂、试剂盒、系统及方法，能够实现快速、全面、敏感、特异、自动的检测结果判定，显著提高了对多种革兰氏阴性菌及其耐药性同时进行检测的敏感性、特异性和简便性。

技术领域

本公开涉及生物技术领域，具体地，涉及一种用于检测革兰氏阴性菌和/或革兰氏阴性菌耐药性的核酸试剂、试剂盒、系统及方法。

背景技术

革兰氏阴性菌在引起感染的病原菌谱中占60％的比例，其中主要为肺炎克雷伯、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、阴沟杆菌、粘质沙雷菌、鲍曼不动杆菌。随着抗生素的大量使用，革兰氏阴性菌逐渐产生了耐药性。耐药性又称抗药性，一般是指细菌与药物多次接触后，对药物的敏感性下降甚至消失，致使药物对耐药菌的疗效降低或无效。耐药菌出现后，很快在不同地域、同种与异种细菌之间进行传递，使未曾使用过该种药物的个体或地区出现耐药菌株且耐药率呈现逐年上升的趋势。而且随着药物种类的增加，耐药菌的耐药谱也越来越广，这已成为临床的诊断和治疗中的极大困扰。

目前，革兰氏阴性菌鉴定方法主要为细菌分离培养、生化反应和血清学方法。整个检测获得最终结果需要2-5天左右，既费时又费力。临床上常用的细菌耐药性检测方法有细菌耐药表型检测、药物敏感试验、质粒消除试验、质粒指纹图谱技术。这些检测方法虽然能够对耐药基因进行系统、全面地鉴定，但是都存在各自技术的弊端。

发明内容

本公开的目的是提供一种快速、准确的检测革兰氏阴性菌和/或革兰氏阴性菌耐药性的核酸试剂、试剂盒、系统及方法。

为了实现上述目的，本公开第一方面：提供一种用于检测革兰氏阴性菌和/或革兰氏阴性菌耐药性的核酸试剂，其中，所述核酸试剂包括分别彼此独立存放或互相任意混合存放的SEQ ID NO.1-60所示的引物和SEQ ID NO.63-92所示的探针。

可选地，相对于0.5μM的SEQ ID NO.1所示的引物，分别由SEQ ID NO.2-60所示的引物的含量各自为0.9～1.1M、0.3～0.6μM、0.9～1.1μM、0.3～0.5μM、0.9～1.1μM、0.5～1μM、0.9～1.1μM、0.4～0.8μM、0.9～1.1μM、0.3～0.6μM、0.9～1.1μM、0.3～0.5μM、0.9～1.1μM、0.5～1μM、0.9～1.1μM、0.4～0.8μM、0.9～1.1μM、0.3～0.6μM、0.9～1.1μM、0.3～0.5μM、0.9～1.1μM、0.5～1μM、0.9～1.1μM、0.3～0.6μM、0.9～1.1μM、0.3～0.5μM、0.9～1.1μM、0.5～1μM、0.9～1.1μM、0.4～0.8μM、0.9～1.1μM、0.3～0.6μM、0.9～1.1μM、0.3～0.5μM、0.9～1.1μM、0.5～1μM、0.9～1.1μM、0.4～0.8μM、0.9～1.1μM、0.3～0.6μM、0.9～1.1μM、0.3～0.5μM、0.9～1.1μM、0.5～1μM、0.9～1.1μM、0.3～0.6μM、0.9～1.1μM、0.3～0.5μM、0.9～1.1μM、0.5～1μM、0.9～1.1μM、0.4～0.8μM、0.9～1.1μM、0.3～0.6μM、0.9～1.1μM、0.3～0.5μM、0.9～1.1μM、0.5～1μM和0.9～1.1μM，分别由SEQ ID NO.63-92所示的探针的含量各自独立地为0.1～0.3μM。

可选地，所述核酸试剂还包括阳性内质控；

所述阳性内质控含有SEQ ID NO.61-62所示的引物和SEQ ID NO.93所示的探针。