[发明专利]一种重叠延伸PCR结合Sanger测序检测耳聋易感基因突变的方法有效
| 申请号： | 201811642909.1 | 申请日： | 2018-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN109777867B | 公开（公告）日： | 2019-12-20 |
| 发明（设计）人： | 郑焱;卢炫廷;邱美兰;谢龙旭;邱雪莲;吴丹叶;徐爱娟 | 申请（专利权）人： | 广州凯普医药科技有限公司;广州凯普医学检验所有限公司;广州凯普生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6883 | 分类号： | C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 44102 广州粤高专利商标代理有限公司 | 代理人： | 任重 |
| 地址： | 510000 广东省广州市黄埔区九*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 易感基因 检测 耳聋 重叠延伸PCR 线粒体DNA 测序反应 扩增 突变 耳聋相关突变位点 简化操作步骤 核苷酸序列 变异位点 检测技术 临床意义 突变检测 突变位点 引物组合 应用 发现 | ||
1.一个检测耳聋易感相关基因突变的引物组合，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ IDNo.1～26所示。
2.权利要求1所述引物组合在制备检测耳聋易感相关基因突变的试剂盒中的应用。
3.一个检测耳聋易感相关基因突变的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述引物组合。
4.根据权利要求3所述试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的检测体系由五个独立的PCR体系组成，分别使用引物混合物1～5：
引物混合物1包括核苷酸如SEQ ID No.1～6所示引物；
引物混合物2包括核苷酸如SEQ ID No.7～12所示引物；
引物混合物3包括核苷酸如SEQ ID No.13～18所示引物；
引物混合物4包括核苷酸如SEQ ID No.19～22所示引物；
引物混合物5包括核苷酸如SEQ ID No.23～26所示引物。
5.根据权利要求3所述试剂盒，其特征在于，还包括PCR反应的试剂、权利要求1所述引物组合的扩增产物的Sanger测序的PCR引物和Sanger测序的试剂。
6.根据权利要求5所述试剂盒，其特征在于，所述Sanger测序的PCR引物的核苷酸序列如SEQ ID No.27～28所示。
7.根据权利要求5所述试剂盒，其特征在于，所述PCR反应的试剂为：
10×GeneAmpTM10×PCR Buffer I、25mM Mg2+、25mM dNTPs、Roche Taq酶、H2O。
8.根据权利要求5所述试剂盒，其特征在于，所述PCR反应的体系为：GeneAmpTM10×PCRBufferI 3μl，25mM Mg2+2.5μl，25mM dNTPs 0.3μl，每条引物各1μl，Roche Taq酶0.5μl，模板1μl，H2O补足至25μl。
9.根据权利要求5所述试剂盒，其特征在于，所述PCR反应的程序为：95℃9min；95℃30s，52℃30s，72℃30s，10个循环；95℃30s，58℃30s，72℃45s，30个循环；72℃5min；16℃∞。
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