[发明专利]检测多种病原体的核酸组合物、试剂盒及试剂盒的使用方法

权利要求书

1.一种检测多种病原体的试剂盒，其特征在于，包括检测多种病原体的核酸组合物和PCR缓冲液，所述核酸组合物包括扩增引物对及与所述扩增引物对应的检测探针；

所述扩增引物对包括如下扩增引物对：序列如SEQ ID No.1及SEQ ID No.2所示的鲍式不动杆菌扩增引物对、序列如SEQ ID No.3及SEQ ID No.4所示的金黄色葡萄球菌扩增引物对、序列如SEQ ID No.5及SEQ ID No.6所示的凝固酶阴性葡萄球菌扩增引物对、序列如SEQID No.7及SEQ ID No.8所示的表皮葡萄球菌扩增引物对、序列如SEQ ID No.9及SEQ IDNo.10所示的绿脓假单胞菌扩增引物对、序列如SEQ ID No.11及SEQ ID No.12所示的肺炎克雷伯菌扩增引物对、序列如SEQ ID No.13及SEQ ID No.14所示的粪肠球菌扩增引物对、序列如SEQ ID No.15及SEQ ID No.16所示的屎肠球菌扩增引物对、序列如SEQ ID No.17及SEQ ID No.18所示的大肠杆菌扩增引物对、序列如SEQ ID No.19及SEQ ID No.20所示的阴沟肠杆菌扩增引物对、序列如SEQ ID No.21及SEQ ID No.22所示的奇异变形杆菌扩增引物对、序列如SEQ ID No.23及SEQ ID No.24所示的白色念珠菌扩增引物对、序列如SEQ IDNo.25及SEQ ID No.26所示的嗜麦芽寡养单胞菌扩增引物对、序列如SEQ ID No.27及SEQID No.28所示的光滑假丝酵母扩增引物对、序列如SEQ ID No.29及SEQ ID No.30所示的近平滑念珠菌扩增引物对、序列如SEQ ID No.31及SEQ ID No.32所示的热带念珠菌扩增引物对、序列如SEQ ID No.33及SEQ ID No.34所示的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌扩增引物对、和序列如SEQ ID No.35及SEQ ID No.36所示的鲍式不动杆菌耐药菌扩增引物对；

所述扩增引物对为六组；其中，第一组包括所述鲍式不动杆菌扩增引物对、所述粪肠球菌扩增引物对和所述嗜麦芽寡养单胞菌扩增引物对；第二组包括所述金黄色葡萄球菌扩增引物对、所述屎肠球菌扩增引物对和所述光滑假丝酵母扩增引物对；第三组包括所述凝固酶阴性葡萄球菌扩增引物对、所述大肠杆菌扩增引物对和所述近平滑念珠菌扩增引物对；第四组包括所述表皮葡萄球菌扩增引物对、所述阴沟肠杆菌扩增引物对和所述热带念珠菌扩增引物对；第五组包括所述绿脓假单胞菌扩增引物对、所述奇异变形杆菌扩增引物对和所述耐甲氧西林金黄色葡萄球菌扩增引物对；第六组包括所述肺炎克雷伯菌扩增引物对、所述白色念珠菌扩增引物对和所述鲍式不动杆菌耐药菌扩增引物对；

与所述扩增引物对对应的检测探针的序列或其互补序列分别如SEQ ID No.37～SEQID No.54所示，检测探针上有荧光基团；

所述PCR缓冲液与所述核酸组合物混合形成反应液，其中，所述反应液中核酸样本的DNA的浓度为10ng～100ng；所述反应液中每个扩增引物对的上游引物和下游引物的终浓度分别为0.1μM～0.5μM和0.1μM～0.5μM；反应液中每个扩增引物对对应的检测探针的终浓度为0.1μM～0.5μM；所述反应液还包括50mM～150mM的Tris-HCl、30mM～60mM的(NH4)₂SO₄、5mM～10mM的MgSO₄、体积百分含量为5％～10％的甘油、体积百分含量为0.66％～1％的牛血清白蛋白、体积百分含量为0.12％～0.5％的乙基苯基聚乙二醇、体积百分含量为0.05％～0.2％的吐温20、100mM～150mM的KCl、4mM～6mM的MgCl₂、1mM～2mM的二硫苏糖醇、体积百分含量为3％～6％的DMSO、80μg/mL～100μg/mL的牛凝血酶和0.4mM～0.8mM的dNTPs。

2.根据权利要求1所述的检测多种病原体的试剂盒，其特征在于，各组内的各所述检测探针上的荧光基团选自FAM、HEX、VIC、CY5及ROX中的一种。