[发明专利]一种免疫细胞冻存液

说明书

本发明涉及一种免疫细胞冻存液，由以下原料组成，以重量份数计：二甲基亚砜4‑16份、羟乙基淀粉0.3‑5.5份、右旋糖酐0.3‑5.5份、葡萄糖0.5‑5份、海藻糖1‑6份、甲基纤维素3‑8份、DMSO 0.5‑5份、丙二醇2‑9份、谷胱甘肽0.1‑0.4份、人供体血浆60‑80份、肝素钠1‑1000U/ml、HSA 3‑8份。相对现有技术，本发明的免疫细胞冻存液中不含动物血清，因此不会引入外源蛋白，降低了动物病原污染的可能性，不会对人体过继免疫治疗产生影响；与进口免疫细胞冻存液相比，成本低，廉价；免疫细胞的复苏率高，免疫细胞增殖活性高，可以长时间保存。

技术领域

本发明涉及细胞技术领域，特别涉及一种免疫细胞冻存液。

背景技术

近年来肿瘤和病毒的免疫治疗技术已经慢慢的应用到了临床。如肿瘤疫苗和过继免疫疗法，这些方法主要是通过自体的免疫细胞经体外刺激、培养、扩增然后回输来提高患者的免疫力，目前该类细胞主要有树突状细胞(DC)，细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)，自然杀伤细胞(NK)，树突状细胞诱导的杀伤细胞(DC-CIK)，嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)等。这些经诱导和扩增培养的免疫细胞，它的初始细胞来源都是外周血或脐血的单个核细胞，而且是直接分离培养。

随着年龄的增长，免疫细胞在体内的活性也会随之降低，所以在年轻时期冻存具有较高活性的免疫细胞，对于未来罹患肿瘤相关疾病的治疗可以起到很好的保障，而且从健康养生的角度来看，也可以在患者本人健康时提取从其外周血中提取免疫细胞，并在以后患者本人出现免疫低下或其他症状时，可以将存储的免疫细胞活化、扩增后回输给患者本人，提高患者的免疫力，因此，保存免疫细胞在基础临床和临床研究上具有重要意义。

但是，目前市面上的免疫细胞冻存液多以胎牛血清、高比例DMSO、患者自体血浆、非临床应用级试剂配制而成，免疫细胞冻存液中不含动物血清，因此不会引入外源蛋白，降低了动物病原污染的可能性，不会对人体过继免疫治疗产生影响，这些冻存液存在以下问题：1.冻存效果差；2.冻存液成分不明确；3.成本过高；4.冷冻液的免疫细胞存活率低。

发明内容

本发明的目的是提供一种免疫细胞冻存液，所要解决的技术问题是：冻存效果差；冻存液成分不明确；成本过高；冷冻液的免疫细胞存活率低。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种免疫细胞冻存液，由以下原料组成，以重量份数计：二甲基亚砜4-16份、羟乙基淀粉0.3-5.5份、右旋糖酐0.3-5.5份、葡萄糖0.5-5份、海藻糖1-6份、甲基纤维素3-8份、DMSO 0.5-5份、丙二醇2-9份、谷胱甘肽0.1-0.4份、人供体血浆60-80份、肝素钠1-1000U/ml、HSA 3-8份。

进一步，由以下原料组成，以重量份数计：二甲基亚砜4份、羟乙基淀粉0.3份、右旋糖酐0.3份、葡萄糖0.5份、海藻糖1份、甲基纤维素3份、DMSO 0.5份、丙二醇2份、谷胱甘肽0.1份、人供体血浆80份、肝素钠1000U/ml、HSA 3份。

进一步，由以下原料组成，以重量份数计：二甲基亚砜16份、羟乙基淀粉5.5份、右旋糖酐5.5份、葡萄糖5份、海藻糖6份、甲基纤维素8份、DMSO 5份、丙二醇9份、谷胱甘肽0.4份、人供体血浆60份、肝素钠1000U/ml、HSA 8份。

进一步，由以下原料组成，以重量份数计：二甲基亚砜10份、羟乙基淀粉3份、右旋糖酐2.8份、葡萄糖3份、海藻糖3.5份、甲基纤维素5.5份、DMSO 2.7份、丙二醇5.5份、谷胱甘肽0.3份、人供体血浆70份、肝素钠500U/ml、HSA 6份。

进一步，人供体血浆通过可采集人体静脉血150-200mL，肝素抗凝；将获得的静脉血，2500rpm离心7min，得下层浓血和上层血浆，吸取上层血浆；将上层血浆56℃水浴30min，然后15000rpm离心5min弃沉淀，获得人供体血浆。