[发明专利]一种保存细胞因子活力的冻干方法

权利要求书

1.一种保存细胞因子活力的冻干方法，其特征在于，包括以下步骤：

选用纯度大于等于99%的干细胞活性因子和冻存保护剂，其中冻存保护剂由以下浓度的原料组成：1-10wt.％甘露醇、1-3wt.%海藻糖、1-5wt.%右旋糖酐、1-3wt.%人血白蛋白、1-4wt.%壳聚糖、0.1-0.3wt.%甘氨酸、3-4wt.%氨基乙酸和0.1-0.3wt.%抗坏血酸；

利用干细胞活性因子和冻存保护剂制备细胞因子冻干粉。

2.根据权利要求1所述一种保存细胞因子活力的冻干方法，其特征在于，冻存保护剂由以下浓度的原料组成：10wt.％甘露醇、1wt.%海藻糖、1wt.%右旋糖酐、1wt.%人血白蛋白、1wt.%壳聚糖、0.1wt.%甘氨酸、3wt.%氨基乙酸和0.1wt.%抗坏血酸。

3.根据权利要求1所述一种保存细胞因子活力的冻干方法，其特征在于，冻存保护剂由以下浓度的原料组成：1wt.％甘露醇、3wt.%海藻糖、5wt.%右旋糖酐、3wt.%人血白蛋白、4wt.%壳聚糖、0.3wt.%甘氨酸、4wt.%氨基乙酸和0.3wt.%抗坏血酸。

4.根据权利要求1所述一种保存细胞因子活力的冻干方法，其特征在于，冻存保护剂由以下浓度的原料组成：6wt.％甘露醇、2wt.%海藻糖、3wt.%右旋糖酐、2wt.%人血白蛋白、3wt.%壳聚糖、0.2wt.%甘氨酸、4wt.%氨基乙酸和0.2wt.%抗坏血酸。

5.根据权利要求1所述一种保存细胞因子活力的冻干方法，其特征在于，选用纯度大于等于99%的干细胞活性因子包括以下步骤：

获取脐带源间充质干细胞，对脐带源间充质干细胞进行培养扩增；

将一部分脐带源间充质干细胞培养至最旺盛时，收集上清至离心管，0.22μm滤膜过滤上清除菌，得第一上清液；

用生理盐水清洗2-3次培养瓶，然后采用细胞饥饿法加入10ml生理盐水/T225培养瓶继续培养另一部分脐带源间充质干细胞12-24小时，待细胞变圆，吹打混匀后移至离心管，采用超声破碎仪破碎细胞后离心1400rpm，离心5min，收集的上清，经0.22μm滤膜过滤除菌，得第二上清液；

将第一上清液和第二上清液混合，采用截留分子量为10KD的纯化超滤系统对混合后的第一上清液和第二上清液进行浓缩，即得干细胞活性因子浓缩液。

6.根据权利要求1所述一种保存细胞因子活力的冻干方法，其特征在于，利用干细胞活性因子和冻存保护剂制备细胞因子冻干粉的具体步骤：

将纯度大于等于99%的干细胞活性因子浓缩液用生理盐水稀释，用注射器抽取稀释后的浓缩原液，0.22um滤器过滤除菌；调节蛋白浓度至1mg/ml，混匀；按照3ml/支分装到无菌、无热原西林瓶，于压强70Pa，温度40℃的冻干条件下冻干36h，冻干结束，真空压盖，西林瓶取出，即制备得到保存细胞因子活力的冻干粉。