[发明专利]一种脐带间质干细胞外泌体分离方法

权利要求书

1.一种脐带间质干细胞外泌体分离方法，其特征在于，包括以下步骤：

将人脐带间质干细胞在培养基中培养2～3天，在细胞培养基中添加干扰素、EPO和PDGF-BB；收集培养基的上清液，对上清液进行离心，收集上层液，得到人脐带间质干细胞外泌体粗液；

将人脐带间质干细胞外泌体粗液经超滤浓缩离心，得到浓缩液；

将浓缩液移至质量浓度为30％的蔗糖重水密度垫上，在4℃条件下，80000～160000g密度梯度离心120min，收集底部缓冲垫；

将底部缓冲垫经PBS溶液洗涤后置于超滤离心管中洗涤，收集浓缩液，得到人脐带间质干细胞外泌体。

2.根据权利要求1所述一种脐带间质干细胞外泌体分离方法，其特征在于，在细胞培养基中添加干扰素、EPO和PDGF-BB具体包括以下步骤：培养基的培养温度为36～38℃；首先加入重组人干扰素、PDGF-BB，在37℃，5％的CO₂条件下培养24小时；然后，再加入EPO，在37℃，5％的CO₂条件下培养72小时。

3.根据权利要求2所述一种脐带间质干细胞外泌体分离方法，其特征在于，其中干扰素的浓度为15U/ml～500U/ml、PDGF-BB的浓度为3ng/ml～50ng/ml，EPO的浓度为0.5IU/ml～4IU/ml。

4.根据权利要求1所述一种脐带间质干细胞外泌体分离方法，其特征在于，收集培养基的上清液，对上清液进行离心的具体步骤为：

收集培养基的上清液，进行离心处理，去除细胞碎片；然后将上清液滤膜过滤处理，去除凋亡小体，得到预处理后的上清液。

5.根据权利要求4所述一种脐带间质干细胞外泌体分离方法，其特征在于，对上清液进行离心的离心转速为1800～2000g；所述离心的时间为8～12min。

6.根据权利要求1所述一种脐带间质干细胞外泌体分离方法，其特征在于，超滤用超滤膜；所述离心速度为1000～2000g；所述离心时间为15～20min。

7.根据权利要求1所述一种脐带间质干细胞外泌体分离方法，其特征在于，还包括对浓缩液进行过滤除菌；过滤用滤膜的孔径为0.22μm。