[发明专利]一种基于核酸适配体信号放大的血小板衍生生长因子PDGF-BB试纸条及检测方法

权利要求书

1.一种基于核酸适配体信号放大的血小板衍生生长因子PDGF-BB试纸条，包括底板，所述的底板上依次粘贴有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，两相邻粘贴物之间部分重叠，所述的硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，其特征在于，所述的结合垫上包被有胶体金-抗体-核酸复合物，所述的检测线上包被有PDGF-BB多克隆抗体，所述的质控线上包被有Poly A；所述的胶体金-抗体-核酸复合物是通过以下方法制备的：用胶体金标记PDGF-BB单克隆抗体，制备得到胶体金-抗体复合物，然后通过PDGF-BB单克隆抗体上的氨基与3’端修饰有羧基的Apt、Apt-Poly T2、Apt-Poly T3、Apt-Poly T4和Apt-Poly T5上带的羧基发生缩合反应，制备得到胶体金-抗体-核酸复合物；所述的Apt为PDGF-BB的核酸适配体，所述的Apt-Poly T2、Apt-Poly T3、Apt-Poly T4和Apt-Poly T5为3’端加有不同长度PolyT的Apt；

所述的Apt的核苷酸序列为：5’-AGGGCGCGTTCTTCGTGGTTACTTTTAGTCCCG-3’；所述的Apt-Poly T2的核苷酸序列为：5’-AGGGCGCGTTCTTCGTGGTTACTTTTAGTCCCGTTTTTTTTTTTTTTT-3’；所述的Apt-Poly T3的核苷酸序列为：5’-AGGGCGCGTTCTTCGTGGTTACTTTTAGTCCCGTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT-3’；所述的Apt-Poly T4的核苷酸序列为：5’-AGGGCGCGTTCTTCGTGGTTACTTTTAGTCCCGTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT-3’；所述的Apt-Poly T5的核苷酸序列为：5’-AGGGCGCGTTCTTCGTGGTTACTTTTAGTCCCGTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT-3’；

所述的Poly A的核苷酸序列为：5’-AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA-3’。

2.根据权利要求1所述的基于核酸适配体信号放大的血小板衍生生长因子PDGF-BB试纸条，其特征在于，所述的底板为PVC底板。

3.根据权利要求1所述的基于核酸适配体信号放大的血小板衍生生长因子PDGF-BB试纸条，其特征在于，所述的检测线和质控线之间的距离为3mm。

4.一种权利要求1-3任一项所述的基于核酸适配体信号放大的血小板衍生生长因子PDGF-BB试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)样品垫的制备：将玻璃纤维膜浸泡在样品垫处理液中，取出干燥，制备得到样品垫；

2)结合垫的制备：用胶体金标记PDGF-BB单克隆抗体，制备得到胶体金-抗体复合物，然后通过PDGF-BB单克隆抗体上的氨基与3’端修饰有羧基的Apt、Apt-Poly T2、Apt-Poly T3、Apt-Poly T4和Apt-Poly T5上带的羧基发生缩合反应，制备得到胶体金-抗体-核酸复合物，经封闭、老化后喷到玻璃纤维膜上，干燥，制备得到结合垫；

3)将PDGF-BB多克隆抗体和Poly A分别划在硝酸纤维素膜上，以PDGF-BB多克隆抗体作为检测线，以Poly A作为质控线；

4)将样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸依次粘贴到底板上，两相邻粘贴物之间部分重叠，得到基于核酸适配体信号放大的血小板衍生生长因子PDGF-BB试纸条。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的样品垫处理液包括4％TritonX-100、1％BSA、2％蔗糖、2％PEG-4000、100mM硼酸、0.1％SDS和0.5μg/mL鲑鱼精DNA，余量为双蒸水，pH 9.0。

6.一种基于核酸适配体信号放大的血小板衍生生长因子PDGF-BB的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：将待测样品滴加到权利要求1-3任一项所述的血小板衍生生长因子PDGF-BB试纸条的样品垫上，然后往样品垫上滴加上样缓冲液，静置5～10min后观察结果，若检测线和质控线都显示红色条带，则判断为阳性，待测样品中含有PDGF-BB，若检测线不显示红色条带，质控线显示红色条带，则判断为阴性，待测样品中不含有PDGF-BB。