[发明专利]一种固定化胰蛋白酶的方法

权利要求书

1.一种固定化胰蛋白酶的方法，包括以下步骤：

步骤一：选择固定化胰蛋白酶的材料40-50份，醋酸水溶液50-100份，将固定材料加入醋酸水溶液中，调至到所需浓度，用高速搅拌机高速搅拌混匀至形成透明粘稠的均一体系溶液，得到第一溶液，静置20-30min除去气泡；

步骤二：在获得的第一溶液中加入20-30份粒径为10μm的二氧化硅球，调制浓度是5%，用搅拌棒慢慢搅拌至小球分散均匀，得到第二溶液，减少气泡的形成；

步骤三：将第二溶液通过内径1mm的管道逐滴滴入含12%氢氧化钠、20%乙醇的水溶液中，滴入的液滴在水溶液中会逐渐形成白色的小球，刚滴入时浮在液面处，后逐渐沉入底部，得到小球A；

步骤四：取50-100份的5%氢氧化钠溶液置于量杯中，并将氢氧化钠溶液加热至80℃，用仪器取出小球A置于量杯中，恒温反应2h-4h，促进小球A中的二氧化硅溶解，形成孔道，得到小球B；

步骤五：取出小球B将其放入清水中清洗至洗涤液为中性为止，得到小球C；

步骤六：取出小球C放入30%甘油溶液中充分浸泡1h-2h，得到小球D；

步骤七：取一个烤箱调节温度至40℃，取出小球D，置于烤箱中烘干10h-20h，得到小球E；

步骤八：称取1g的小球E，按每克小球E，每5ml的戊二醛溶液的量加入戊二醛溶液修饰表面基团，反应避光进行 2h-4h，避免戊二醛的自我交联，修饰结束后将小球取出，用清水洗涤5-10遍，去除多余的戊二醛，获得的小球称为小球F；

步骤九：将小球F加入胰蛋白酶液中，在4℃条件下固定2h-5h，固定完成后用pH=8.0的缓冲液冲洗3-5次，得到固定化胰蛋白酶。

2.根据权利要求1所述的一种固定化胰蛋白酶的方法，其特征在于，所述步骤一中固定化胰蛋白酶的材料是壳聚糖，脱乙酰程度大于90%。

3.根据权利要求1所述的一种固定化胰蛋白酶的方法，其特征在于，所述步骤一中将固定材料加入醋酸水溶液中，调节到所需的浓度为5%。

4.根据权利要求1所述的一种固定化胰蛋白酶的方法，其特征在于，所述步骤六中30%甘油溶液的作用为使小球C 充分吸收甘油，在烘干的过程中不会发生塌缩的现象。

5.根据权利要求1所述的一种固定化胰蛋白酶的方法，其特征在于，所述步骤八中戊二醛溶液的浓度为1%。