[发明专利]一种脱氧胆酸修饰的纳米复合物及其制备与应用

说明书

本发明公开了一种脱氧胆酸修饰的纳米复合物及其制备与应用，本发明首先采用碳二亚胺缩合反应制备脱氧胆酸‑低分子壳聚糖共轭物，然后通过离子交联法制备脱氧胆酸修饰的低分子壳聚糖/羧甲基壳聚糖纳米复合物。该纳米复合物包封率和载药量较高，分别为(90.7±0.73)％和(6.5±0.29)％；体外释药具有pH敏感性，且可通过转运体‑配体的相互作用显著提高Caco‑2细胞的摄取率(提高2倍)；药动学实验表明该纳米复合物可显著提高RH的口服吸收，有效实现大黄酸的口服递送。本发明纳米复合物的制备方法简单易行，DOCA的修饰可使该纳米复合物与小肠胆酸转运体有效结合而被上皮细胞高效摄取，有利于提高药物的口服吸收。

(一)技术领域

本发明涉及一种中药难溶性活性成分的负载方法，特别涉及一种脱氧胆酸-低分子壳聚糖/羧甲基壳聚糖纳米复合物及其在提高小肠上皮细胞摄取效率，增加药物口服吸收中的应用。

(二)背景技术

低分子壳聚糖(low molecular weight chitosan，LMWC)是一种广泛用于纳米粒制备的生物可降解材料。然而LMWC作为一种阳离子聚合物，用于口服递送极易受到胃酸环境的破坏而导致药物突释及漏释。羧甲基壳聚糖(CMCs)为一种阴离子聚合物，可以与低分子壳聚糖通过静电吸附自组装形成具有pH响应特性的纳米复合物，从而能够避免胃酸低pH环境的降解，维持纳米粒在胃肠道中的稳定性。并且纳米复合物还可更好地控制所负载药物的释放。但由于亲水性的纳米复合物与细胞膜的亲和力较差，故仍在一定程度上限制了其用于药物的口服递送。

小肠顶端钠依赖性胆汁酸转运蛋白(ASBT)能够将内源性小分子胆汁酸从肠细胞顶侧转移到细胞质，以维持肠肝胆汁酸循环。研究报道，脱氧胆酸(DOCA)及其衍生物与纳米复合物结合后，能够在一定程度上增强其疏水性，从而改善纳米复合物在肠壁上的通透性，并能有效地与ASBT相互作用，从而增加药物的口服吸收。

本发明首先将脱氧胆酸与低分子壳聚糖进行结合，再与羧甲基壳聚糖通过静电吸附自组装形成纳米复合物(Nanocomplex,NCs)，包裹大黄酸(RH)后形成大黄酸：脱氧胆酸-低分子壳聚糖/羧甲基壳聚糖纳米复合物(RH:DOCA-LMWC/CMCs NCs)，用于大黄酸的口服递送。

(三)发明内容

本发明的目的是构建一种新型的脱氧胆酸修饰的低分子壳聚糖/羧甲基壳聚糖纳米复合物(DOCA-LMWC/CMCs NCs)，利用脱氧胆酸(DOCA)与小肠顶端钠依赖性胆汁酸转运蛋白(ASBT)结合的特性，实现纳米复合物从小肠上皮顶侧向基底侧的转运，从而促进中药难溶性活性成分大黄酸(RH)的口服吸收。

本发明采用的技术方案为：

本发明提供一种脱氧胆酸修饰的纳米复合物，即脱氧胆酸修饰的低分子壳聚糖/羧甲基壳聚糖纳米复合物(DOCA-LMWC/CMCs NCs)，所述纳米复合物按如下方法制备：

(1)脱氧胆酸的活化：在搅拌条件下，将脱氧胆酸(DOCA)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)溶于二甲基亚砜(DMSO)中，室温(25-30℃)下搅拌反应2～4h(优选2h)，获得活化的脱氧胆酸；所述DOCA与EDC、NHS的物质的量之比为1:2:2；所述二甲基亚砜的体积用量以脱氧胆酸重量计为3ml/31mg；

(2)脱氧胆酸-低分子壳聚糖共轭物(DOCA-LMWC)的合成：在搅拌条件下，向低分子壳聚糖(LMWC)溶液中加入步骤(1)活化后的脱氧胆酸，室温(25-30℃)反应20～30h(优选24h)后于去离子水中透析2～5天(优选3天，透析袋的截留分子量为3500Da)，取截留液冻干(优选-50℃冷冻干燥48h)后，得白色的DOCA-LMWC共轭物；所述低分子壳聚糖溶液是将低分子壳聚糖溶于体积浓度90％DMSO水溶液制成浓度为12g/L的溶液；所述活化后的脱氧胆酸用量以脱氧胆酸羧基物质的量计，所述低分子壳聚糖用量以低分子壳聚糖氨基物质的量计，所述脱氧胆酸羧基与低分子壳聚糖氨基物质的量之比为1:2～4；