[发明专利]一种适合质谱检测的糖链结构异常蛋白的前处理组合物、前处理方法及应用

权利要求书

1.一种适合质谱检测的糖链结构异常蛋白的前处理组合物，其包括偶联有凝集素的载体和洗脱液，所述偶联有凝集素的载体用于特异性分离待测样本中的目标糖链结构异常蛋白，所述洗脱液用于洗脱所述偶联有凝集素的载体上吸附的目标糖链结构异常蛋白；其中：用于偶联凝集素的载体为高分子材料微球，所述洗脱液洗脱获得的目标糖链结构异常蛋白溶液直接用于质谱检测分析；所述洗脱液包括分析纯级以上的甲酸铵、乙酸铵、甲酸、乙酸、氨水、碳酸氢铵、碳酸铵、乙腈的任意一种水溶液或两种及以上的化学试剂的混合水溶液；所述洗脱液的浓度为0.01％-1％；

所述前处理组合物还包括清洗液，用于清洗偶联有凝集素的载体上非特异性吸附的其他杂质；

所述前处理组合物还包括人血白蛋白抗体-载体复合物，用于去除洗脱液中因非特异性结合而残留的微量人血白蛋白；每1000ml用于偶联人血白蛋白抗体的载体上至少偶联有1mg人血白蛋白抗体；

所述偶联有凝集素的载体同时包括偶联有小扁豆凝集素的载体、偶联有芸豆凝集素的载体、偶联有刀豆凝集素A的载体和偶联有蜗牛凝集素的载体；偶联有小扁豆凝集素、芸豆凝集素、刀豆凝集素A和蜗牛凝集素的4种载体之间的体积比为1-2:1-2:1-2:1-2；每1ml用于偶联凝集素的高分子材料微球上偶联有1-30mg的凝集素；

所述高分子材料微球的粒径分布范围为0.1μm-200μm；

所述高分子材料微球的材质为环氧树脂、硅化物、聚苯乙烯、葡聚糖、琼脂糖、纤维素中的至少一种；

所述待测样本为人血清、血浆中的任意一种样本类型；

所述目标糖链结构异常蛋白包括：用于肝癌诊断的核心岩藻糖基化糖链结构异常蛋白AFP-L3、用于类风湿性关节炎早期诊断的IgG糖链结构异常蛋白IgG0、用于IgA肾病诊断的IgA糖链结构异常蛋白IgA1、用于妊娠反应和肿瘤标志物诊断的人绒毛膜促性腺激素HCG中的至少一种；

其中：使用所述前处理组合物步骤为：

使用前处理组合物中的偶联有凝集素的载体分离待测样本中的目标糖基化蛋白；

使用前处理组合物中的清洗液，清洗偶联有凝集素的载体上非特异性吸附的其他杂质；

使用前处理组合物中的洗脱液，洗脱偶联有凝集素的载体上特异性吸附的糖基化蛋白的步骤；

使用前处理组合物中的人血白蛋白抗体-载体复合物去除洗脱液中因非特异性结合而残留的微量人血白蛋白；

所得样品用于质谱检测分析。

2.根据权利要求1所述前处理组合物，其特征在于，所述目标糖链结构异常蛋白同时包括：用于肝癌诊断的核心岩藻糖基化糖链结构异常蛋白AFP-L3、用于类风湿性关节炎早期诊断的IgG糖链结构异常蛋白IgG0、用于IgA肾病诊断的IgA糖链结构异常蛋白IgA1和用于妊娠反应和肿瘤标志物诊断的人绒毛膜促性腺激素HCG。

3.根据权利要求1所述前处理组合物，其特征在于，所述高分子材料微球的粒径分布范围为1μm-200μm或20μm-200μm。

4.根据权利要求1所述前处理组合物，其特征在于，所述偶联有凝集素的载体通过包括以下步骤的方法获得：将经过活化、已完全溶胀并清洗干净的高分子材料微球与凝集素混合反应；每1ml高分子材料微球要加入1-30mg凝集素；反应的条件为在0.1-1M碳酸盐缓冲液溶液中，室温条件下反应0.5-5h。

5.根据权利要求4所述前处理组合物，其特征在于，所述高分子材料微球为琼脂糖微球。

6.根据权利要求1所述前处理组合物，其特征在于，所述洗脱液为乙酸铵水溶液。

7.据权利要求1所述前处理组合物，其特征在于，所述洗脱液的浓度为0.05％-0.5％。

8.根据权利要求1所述前处理组合物，其特征在于，人血白蛋白抗体为人血白蛋白单克隆抗体；所述人血白蛋白抗体-载体复合物包括高分子材料微球；人血白蛋白抗体-载体复合物中高分子材料微球的粒径分布范围为0.1μm-200μm。