[发明专利]一种脂肪酶的固定化方法

说明书

本发明公开了一种脂肪酶的固定化方法，包括如下步骤：1)将Na₂HPO₄溶液和柠檬酸溶液混合均匀，得到Na₂HPO₄‑柠檬酸缓冲液；2)将液体脂肪酶溶于Na₂HPO₄‑柠檬酸缓冲液中，调节pH值为7.5‑8.5，得到酶缓冲溶液；3)将载体加入酶缓冲溶液中，得到载体/脂肪酶混合液，然后将载体/脂肪酶混合液在空气浴摇床进行固定，经过滤、洗涤、干燥，得到固定化脂肪酶。本发明提供一种脂肪酶的固定化方法，本方法制备的固定化脂肪酶可重复使用，使酶的使用效率提高、使用成本降低；固定化脂肪酶极易与反应体系分离，简化了提纯工艺，而且产品收率高、质量好，酶经固定化后稳定性得到提高，其催化反应过程更易控制。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种脂肪酶的固定化方法。

背景技术

酶是由活细胞产生的、催化特定生物化学反应的一种生物催化剂。酶制剂是酶经过提纯、加工后的具有催化功能的生物制品，主要用于催化生产过程中的各种化学反应，具有催化效率高、高度专一性、作用条件温和、降低能耗、减少化学污染等特点，其应用领域遍布食品、纺织、饲料、洗涤剂、造纸、皮革、医药以及能源开发、环境保护等多个方面。

脂肪酶是酶制剂的一个大类，可溶于水溶液中，但其天然底物如油脂却不溶于水。虽然采用适当的有机溶剂或乳化剂有助于酶与底物的结合，但脂肪酶在非均相反应体系的实际利用中仍存在一些问题，比如反应系统中残存的酶可能对产物的质量产生不利影响的问题。另外游离酶的使用寿命相对较短，从而使成本增加。如果将脂肪酶固定化，使其在反应体系中成为独立相，便可通过机械手段固定于反应器中，这样就不会污染产物，使用寿命也大大延长。

固定化酶(immobilized enzyme)是20世纪60年代发展起来的一种新技术。所谓固定化酶，是指在一定的空间范围内起催化作用，并能反复和连续使用的酶。通常酶催化反应都是在水溶液中进行的，而固定化酶是将水溶性酶用物理或化学方法处理，使之成为不溶于水的，但仍具有酶活性的状态。系统的固定化酶技术的研究开始于20世纪50年代，德国的Grubhofer和Schleith率先将聚氨基苯乙烯树脂重氮化，然后与淀粉酶、胃蛋白酶等结合，制成最早的固定化酶。但直到1971年第一届国际酶工程(Enzyme Engineering)会议，这种技术才被正式命名为固定化酶技术。之后人们对固定化酶的研究取得了长足的进展，包括固定化技术、载体材料及其在生化过程和酶制剂中的应用等。

依据游离酶的理化特性和用途，酶的固定化方法可分为物理方法和化学方法。物理方法主要包括包埋法、吸附法；化学方法主要有化学交联法和共价键法。当前，由于固定化酶的方法过于复杂，效率低、成本高，或使用了有毒的化学试剂而不符合食品加工所必须满足的经济和安全的标准，所有这些都限制了固定化脂肪酶技术在食品工业中的应用。

发明内容

针对上述现有的酶的固定化方法存在的问题，本发明提供一种脂肪酶的固定化方法，具有流程简单，且有产品收率高、稳定性好的优点。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：

一种脂肪酶的固定化方法，其中，包括如下步骤：

1)将Na2HPO4溶液和柠檬酸溶液混合均匀，得到Na₂HPO₄-柠檬酸缓冲液；

2)将液体脂肪酶溶于Na₂HPO₄-柠檬酸缓冲液中，调节pH值为7.5-8.5，得到酶缓冲溶液；

3)将载体加入酶缓冲溶液中，得到载体/脂肪酶混合液，然后将载体/脂肪酶混合液在空气浴摇床进行固定，经过滤、洗涤、干燥，得到固定化脂肪酶。