[发明专利]抗恶性疟原虫HRP-II重组抗体

说明书

本发明涉及抗恶性疟原虫HRP‑II重组抗体。本发明提供抗恶性疟原虫HRP‑II抗体或其抗原结合片段，所述抗体包含SEQ ID NO：1‑3所示的氨基酸序列或其变体的重链CDRs，SEQ ID NO：4‑6所示的氨基酸序列或其变体的轻链CDRs。本发明提供所述抗体的用途以及制备所述抗体的方法。

技术领域

本发明涉及疟原虫抗体、其用途以及制备方法。具体而言，本发明涉及恶性疟原虫富组氨酸蛋白-II(Histidine-rich protein II，HRP-II)的抗体，其用于检测或诊断疟疾的用途，以及通过基因工程技术制备所述抗体的方法。

背景技术

疟疾(Malaria)是经按蚊叮咬或输入带疟原虫者的血液而感染疟原虫所引起的一种虫媒传染病。寄生于人体的疟原虫主要有四种：间日疟原虫(Plasmodium vivax，pv)、恶性疟原虫(Plasmodium falciparum，Pf)、三日疟原虫(Plasmodium malariae，pm)、卵形疟原虫(Plasmodium ovale，po)。恶性疟原虫是常见的感染性疟原虫(75％)，是危害最大的病原体，它感染力强，增殖迅速，症状严重，初次感染者致死率高，由其引起的死亡占感染者死亡总数的95％以上，主要存在于非洲、南美和亚洲的热带地区；间日疟原虫是第二常见的疟原虫(20％)，也是非洲以外地区最常见的种类。WHO建议所有疟疾疑似患者应该即时进行疟疾的检测，疾病的快速、准确诊断对于抗疟药的正确使用，避免耐药株的产生及控制病情恶化、降低死亡率至关重要。

疟疾诊断是疟疾防治工作的重点。从检测技术原理上进行归类，目前检测疟原虫的方法可以分为四类。一是显微镜直接检测疟原虫，包括厚血膜和薄血膜，这也是目前临床上疟疾诊断的金标准。但费时，费力，需要熟练的技术人员和一定的实验条件。二是疟原虫核酸检测，检测靶标为疟原虫18S核糖体RNA等特异性核苷酸片段，常用的方法为荧光PCR方法和环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification LAMP)。该类方法虽然灵敏度和特异性高，但需要更复杂的仪器设备和技术条件作为支持，不适合作为疟疾流行区常规的检测手段，难以在基层推广应用。三是检测疟原虫色素，通常采用流式细胞检测技术或质谱方法。该方法需要专业的检测仪器，一般用于实验室研究，不适用现场检测。四是抗原抗体的免疫反应检测疟原虫，方法学上有免疫层析快速诊断试剂(RDT)和酶联免疫吸附(ELISA)，检测的靶抗原大多为LDH、HRP-II等诊断抗原。以抗原为检测目标的RDT应用在恶性疟原虫流行的落后地区具有重要意义，因其操作简便、快速、结果直观，无需复杂设备、敏感性和特异性高等优点，是WHO推荐用于现场诊断的方法。

目前，常用的检测疟疾抗原主要为恶性疟原虫特有的富组氨酸蛋白-II(Histidine-rich protein II，HRP-II)和疟原虫乳酸脱氢酶(Plasmodium Lactatedehydiogenase，PLDH)。HRP-II是恶性疟原虫特有的35-105kDa水溶性蛋白质，只在红内期无性体期和早期配子体期合成，合成开始于未成熟的环状体，含量在整个红内期随裂殖子的分裂逐渐升高，能持续28d，对成熟配子体期难以检测到。HRP-II蛋白以可溶形式分泌入宿主血液中，同时该蛋白在脑脊液、尿液及唾液中均可检测到，是最为认可的恶性疟原虫诊断标志物。通过特异的单克隆抗体检测HRP-II可以判断人体内恶性疟原虫的存在。