[实用新型]适合基层医院使用的尿液外泌体富集系统

说明书

本实用新型适用于医疗器械技术领域，提供了一种适合基层医院使用的尿液外泌体富集系统，包括：低速离心机，将所述尿液进行低速离心处理产生上清液；滤过膜滤过系统，用于过滤所述上清液中除外泌体外的杂质，与所述低速离心机分体设置，其对应于第一过滤阶段设置有第一过滤单元；对应于第二过滤阶段设置有第二过滤单元。借此，本实用新型的适合基层医院使用的尿液外泌体富集系统成本低廉，便于将尿液中的外泌体富集。

技术领域

本实用新型涉及医疗器械技术领域，尤其涉及一种适合基层医院使用的尿液外泌体富集系统。

背景技术

Exosome，中文名外泌体，是一种能被大多数细胞分泌的微小膜泡，具有脂质双层膜结构，直径大约40-100nm。尽管外泌体最初在1983年就被发现，但人们一直认为它只是一种细胞的废弃物。然而最近几年，人们发现这种微小膜泡中含有细胞特异的蛋白、脂质和核酸，能作为信号分子传递给其他细胞从而改变其他细胞的功能。这些发现点燃了人们对细胞分泌膜泡的兴趣。最近的研究发现外泌体在很多生理病理上起着重要的作用，如免疫中抗原呈递、肿瘤的生长与迁移、组织损伤的修复等。不同细胞分泌的外泌体具有不用的组成成分和功能，可作为疾病诊断的生物标志物。外泌体具有脂质双层膜结构，能很好的保护其包被的物质，且能靶向特定细胞或组织，因此是一种很好靶向给药系统。外泌体作为一个新型的研究热点，由于它在体内存在的广泛性和获取的便捷性，已经成为了疾病诊断、治疗的潜在有效方式，在精准医学发展上有着光明的前景。

尿液作为一种无创的检测标本的来源，越来越受到大家的关注。尿液中的外泌体携带有肾脏结构和功能损伤的分子标记物，有助于肾脏疾病的诊断；尿液外泌体蛋白组学的研究有助于相关疾病病理生理机制的研究，有助于寻找潜在的新的疾病治疗靶点。

目前国内外报道分离外泌体的主要方法是超速离心法。超高速离心分离提取尿液外泌体步骤:

1、17000xg centrifugation(离心力为17000xg进行离心分离):分离细胞，大的细胞碎片：

1.1、17000xg for 10min at 37℃(进行离心分离，离心力为17000xg，温度为37℃、分离时间为10分钟)；

1.2、保留上清液，这是上清液1；

1.3、用分离液沉淀重悬(根据沉淀的多少加入适量分离液),往沉淀悬液中加入DTT,使其终浓度为200mg/ml

1.4、37℃水浴沉淀悬液for 5-10min(时间为5～10分钟),每隔1-2min(1～2 分钟)涡旋一次,直至沉淀完全溶解

1.5、将沉淀悬液转移至离心管，17000xg for 10min at 37℃(进行离心分离，离心力为17000xg，温度为37℃、分离时间为10分钟)，收集上清液2。

2、200000xg centrifugation(离心力为200000xg进行离心分离):使细胞外囊泡沉淀：

2.1、将上清液1和上清液2收集到一起，在离心力为200000xg下温度为 37℃离心1h(1小时)

3、Resuspension of extracellular vesicles(重悬细胞外囊泡)

3.1、将上清丢弃

3.2、用PBS(phosphate buffer saline,磷酸缓冲盐溶液)重悬细胞外囊泡。

超速离心法需要的超速离心机只有著名大学、部分科研机构、部分发达地区的三甲医院拥有，使得这一方法使用受限；其次，该方法一次处理样本量有限。

综上所述，目前仍缺少一种可推广至基层医院的将尿液细胞外外泌体富集用于糖尿病肾病早期诊断的装置。

实用新型内容