[发明专利]利用竞争性链置换构建下一代测序(NGS)文库在审
| 申请号： | 201880007147.X | 申请日： | 2018-01-26 |
| 公开（公告）号： | CN110248675A | 公开（公告）日： | 2019-09-17 |
| 发明（设计）人： | 扎卡里·茨威科;郑俞;米娜·贾罗斯;陈采夫;约瑟夫·瓦尔德 | 申请（专利权）人： | 合成DNA技术公司 |
| 主分类号： | A61K38/53 | 分类号： | A61K38/53;C12N15/09;C12N15/10;C12P19/34 |
| 代理公司： | 中原信达知识产权代理有限责任公司 11219 | 代理人： | 金海霞;刘慧 |
| 地址： | 美国爱*** | 国省代码： | 美国;US |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 测序 构建 文库 宏基因组 全基因组 样品制备 链置换 靶向 筛选 应用 | ||
1.一种制备测序用靶核酸片段的方法，所述方法包括：
a.用第一连接酶将第一接头序列连接到所述靶核酸片段的3'末端；和
b.用第二连接酶将第二接头序列连接到所述靶核酸片段的5'末端，
c.其中所述第一接头序列在其5'末端上被腺苷酸化，并且
d.其中所述第一连接酶是腺苷酸化缺陷型ATP依赖性连接酶。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一连接酶是在K159处具有氨基酸取代的T4DNA连接酶。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述氨基酸取代是K159S。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述第二连接酶是ATP依赖性连接酶。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述第二连接酶是非ATP依赖性连接酶。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述第二连接酶是NAD依赖性连接酶。
7.一种制备测序用靶核酸片段样品的方法，所述方法包括：
a.用第一连接酶将多个第一接头序列连接到所述靶核酸片段的3'末端，其中所述第一接头序列包含
i.在5'末端上的可变标签序列，其用于独立地标记每个靶片段的正义链和反义链的3'末端，和
ii.位于所述可变标签序列的3'的恒定序列，
b.将第二接头序列退火到每个连接的第一接头序列的恒定序列，其中所述第二接头序列在其3'末端上包含与每个第一接头序列的恒定序列互补的恒定序列，
c.用聚合酶填充所产生的跨越第一可变标签序列的间隙，产生多个第二可变标签序列，每个第二可变标签序列与其相应的第一可变标签序列互补，用于独立地标记靶片段的正义链和反义链的5'末端，以及
d.用第二连接酶将所述第二标签序列的3'末端连接到所述靶序列的5'末端，
e.其中所述第一接头序列在其5'末端上被腺苷酸化，并且
f.其中所述第一连接酶是腺苷酸化缺陷型ATP依赖性连接酶。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述第一连接酶是在K159处具有氨基酸取代的T4DNA连接酶。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述氨基酸取代是K159S。
10.根据权利要求7所述的方法，其中所述第二连接酶是ATP依赖性连接酶。
11.根据权利要求7所述的方法，其中所述第二连接酶是非ATP依赖性连接酶。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述第二连接酶是NAD依赖性连接酶。
13.根据权利要求7所述的方法，其中所述标签序列的碱基是简并的。
14.根据权利要求7所述的方法，其中所述标签序列的碱基是固定的。
15.根据权利要求7所述的方法，其中所述标签序列的碱基是简并的和固定的两种。
16.根据权利要求7所述的方法，其中所述标签序列的长度在3至20个核苷酸之间。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于合成DNA技术公司，未经合成DNA技术公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201880007147.X/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：用于治疗胰腺癌的包括SapC-DOPS的联合疗法
- 下一篇：组合疗法
