[发明专利]从干细胞分化诱导的软骨细胞的制备方法

权利要求书

1.一种从干细胞分化诱导的软骨细胞的制备方法，其特征在于，包括：

步骤i)，从来源于脐带血单核细胞的逆分化干细胞形成并获得拟胚体；

步骤ii)，从上述步骤i)的拟胚体形成并获得拟胚体衍生的生长细胞；以及

步骤iii)，培养上述步骤ii)的拟胚体衍生的生长细胞来获得软骨细胞体。

2.根据权利要求1所述的从干细胞分化诱导的软骨细胞的制备方法，其特征在于，通过重编程脐带血单核细胞来获得上述步骤i)的来源于脐带血单核细胞的逆分化干细胞。

3.根据权利要求2所述的从干细胞分化诱导的软骨细胞的制备方法，其特征在于，上述重编程是对脐带血单核细胞处理包含Yamanaka因子的仙台病毒来诱导成多能细胞。

4.根据权利要求1所述的从干细胞分化诱导的软骨细胞的制备方法，其特征在于，通过对明胶培养基涂抹拟胚体来形成上述步骤ii)的拟胚体衍生的生长细胞。

5.根据权利要求4所述的从干细胞分化诱导的软骨细胞的制备方法，其特征在于，每1cm²的上述明胶培养基中涂抹50～70个拟胚体。

6.根据权利要求1所述的从干细胞分化诱导的软骨细胞的制备方法，其特征在于，上述步骤i)的来源于脐带血单核细胞的逆分化干细胞为HLA纯合体。

7.根据权利要求6所述的从干细胞分化诱导的软骨细胞的制备方法，其特征在于，上述HLA纯合体的类型为韩国人的HLA纯合体的类型。

8.根据权利要求7所述的从干细胞分化诱导的软骨细胞的制备方法，其特征在于，上述韩国人的HLA纯合体的类型为选自由HLA-A*33、HLA-B*44及HLA-DRB1*13组成的组中的一种。

9.一种从干细胞分化诱导的软骨细胞的制备方法，其特征在于，包括：

步骤i)，通过培养逆分化干细胞来形成拟胚体；

步骤ii)，通过在明胶涂层培养基中培养在上述步骤i)中形成的拟胚体来获得拟胚体衍生的生长细胞；

步骤iii)，将在上述步骤ii)中获得的拟胚体衍生的生长细胞转导于包含用于编码BMP2的碱基序列的小环载体或包含用于编码TGFβ3的碱基序列的小环载体中的一种或两种之中；

步骤iv)，将在上述步骤iii)中转导的拟胚体衍生的生长细胞分化诱导成软骨细胞；以及

步骤v)，获得在上述步骤iv)中分化诱导的软骨细胞。

10.一种从干细胞分化诱导的软骨细胞的制备方法，其特征在于，包括：

步骤i)，通过培养逆分化干细胞来形成拟胚体；

步骤ii)，通过在明胶涂层培养基中培养在上述步骤i)中形成的拟胚体来获得拟胚体衍生的生长细胞；

步骤iii)，将在上述步骤ii)中获得的拟胚体衍生的生长细胞转导于包含用于编码BMP2的碱基序列的小环载体中；

步骤iv)，将在上述步骤ii)中获得的拟胚体衍生的生长细胞转导于包含用于编码TGFβ3的碱基序列的小环载体中；

步骤v)，将在上述步骤iii)中转导的拟胚体衍生的生长细胞以及在上述步骤iv)中转导的拟胚体衍生的生长细胞混合培养来分化诱导成软骨细胞；以及

步骤vi)，获得在上述步骤v)中分化诱导的软骨细胞。

11.根据权利要求9或10所述的从干细胞分化诱导的软骨细胞的制备方法，其特征在于，上述包含用于编码BMP2的碱基序列的小环载体为如下的非病毒性载体：

(a)包含由CMV启动子、序列1的碱基序列组成的BMP2基因以及包含SV40聚腺苷酸化序列的基因表达盒；

(b)包含位于上述(a)的基因表达盒外部的噬菌体λ的att附着序列；以及

(c)不包含复制起始点及抗生素抗性基因。