[发明专利]诊断恶性疾病的方法

说明书

公开了一种用于诊断受试者的恶性增殖疾病或障碍，和/或用于随访、监测或预后受试者的恶性增殖疾病或障碍疗法的方法。该方法基于测量基本上包含获自受试者的血小板的样品中血小板介导的纤维蛋白原样蛋白2(FGL2)活性。根据所公开的方法，血小板介导的FGL2活性水平高于对照表明受试者中存在恶性增殖疾病或障碍。

技术领域

本发明至少部分涉及基于纤维蛋白原样蛋白2活性来诊断和监测恶性疾病的方法。

背景技术

纤维蛋白原样蛋白2(FGL2)也称为纤维介素，是纤维蛋白原相关蛋白超家族的成员，其在不同物种中具有高度保守性。人类基因长度约为7kb，具有2个外显子。根据人类基因的核苷酸序列，预测了439个氨基酸长的蛋白。

血栓形成和炎症受各种有助于各途径的病理生理学的蛋白和细胞的调控。纤维蛋白原样蛋白2被认为是该轴的主要参与者，表现出涉及正常和病理过程的多种功能，从而作为免疫凝血和炎症的重要介质。

纤维蛋白原样蛋白2涵盖了两种结构和功能上不同的形式。可溶性形式FGL2(sFGL2)由调控性T细胞(外周血CD4⁺和CD8⁺T细胞)表达和分泌。可溶性FGL2缺乏N-末端区域(～50kDa)并且具有显著的免疫抑制性质，同时被认为缺乏促凝血活性。

膜结合形式的FGL2(mFGL2)在本文中也称为“FGL2凝血酶原酶”，含有N-末端区域(～65kDa)并具有促凝血活性。它是一种丝氨酸蛋白酶，能够在绕过典型凝血途径的同时将凝血酶原直接切割成凝血酶。据报道mFGL2形式主要在巨噬细胞、树突细胞、内皮细胞、上皮细胞和癌细胞的表面上表达。有趣的是，据报道mFGL2促凝血活性主要是对病理刺激的响应，而可溶性形式(sFGL2)由淋巴细胞组成型表达和分泌。膜结合的FGL2不需要被切割而活化，它在不存在因子VII或因子X时导致纤维蛋白沉积，并且引发血栓形成，然而，它仍然需要因子Va、钙和磷脂以达到其最大酶活性。

mFGL2的重要性体现在归因于它的功能和应用范围上。该蛋白在各种生物过程中起关键作用，包括胚胎发育和流产、微血栓形成、炎症免疫响应、病毒感染和暴发性肝炎、缺血/再灌注损伤、同种异体移植排斥和肿瘤发生。

在各种类型的实体肿瘤中观察到FGL2蛋白和FGL2mRNA表达的增加，而肿瘤周围的正常组织未显示出在肿瘤本身中观察到的FGL2的过表达，并且已经表明了FGL2在肿瘤进展中起作用(Su,K.等人(2008)World J.Gastroenterol.14(39):5980-5989)。肿瘤细胞和环境中的纤维蛋白原样蛋白2可通过几种提出的可能机制影响肿瘤发展，例如增强肿瘤细胞增殖、诱导血管生成和转移、活化MAPK途径、促进免疫抑制和产生凝血酶而导致凝血酶介导的肿瘤发生。

尽管血液中活性FGL2凝血酶原酶具有生物学可用性，但并没有关于该活性促凝血形式在外周血细胞(PBC)中的确切来源和显著性的公开数据。

血小板对止血、炎症、感染、免疫和恶性疾病具有多用途作用和显著影响。止血被认为是血小板的主要作用。除了聚集之外，活化的血小板提供了磷脂酰丝氨酸磷脂表面，其上定位有血液凝血级联的复杂反应。血小板进一步储存并分泌凝血因子和辅因子，包括因子V、因子XI、因子XIII、凝血酶原(以其无活性形式)、高分子量激肽原和多磷酸盐。血小板在肿瘤发展中的病理生理学作用已被公认(参见例如Franco等人,Blood,126:582-588,2015；Golebiewska和Poole,Blood Rev.,29:153-162,2015)。

发明内容

本公开至少部分涉及一种用于诊断受试者的恶性增殖疾病或障碍的方法，其包括以下步骤：(a)获得含有受试者的血小板的生物样品；(b)在生物样品中诱导血小板介导的纤维蛋白原样蛋白2(FGL2)活性；(c)测量样品中的FGL2活性水平；(d)将测量的FGL2活性水平与对照值的活性水平进行比较，由此具有高于对照的血小板介导的FGL2活性水平的样品表明受试者存在恶性增殖疾病或障碍。