[发明专利]戊型肝炎病毒ORF2衣壳多肽及其用途

说明书

戊型肝炎病毒(HEV)是全世界超过50％的急性病毒性肝炎病例的原因。发明人现在鉴定了感染性颗粒相关的ORF2衣壳蛋白的精确序列。异乎寻常地，他们的分析显示，在感染患者中，HEV产生三种形式的ORF2衣壳蛋白：ORF2i、ORF2g和ORF2c。ORF2i蛋白与感染性颗粒相关，而ORF2g和ORF2c蛋白是大量产生的糖蛋白，它们与感染性颗粒无关，并且是HEV感染患者血清中存在的主要抗原。因此，ORF2i和ORF2g蛋白，以及对蛋白质具有特异性的抗体和用于诊断戊型肝炎病毒感染的诊断测定(例如ELISA)是本发明的主题。

技术领域

本发明涉及戊型肝炎病毒ORF2衣壳多肽及其用途。

背景技术

戊型肝炎病毒(HEV)是全球肠道传播的病毒性肝炎的主要病因，每年导致2000万例感染和70,000例死亡¹。虽然HEV感染通常能自我恢复，但已经描述了严重型或慢性感染，主要是在免疫功能低下的患者中。孕妇的死亡率也很高。HEV感染还与肝外疾病有关，包括肾脏和神经疾病²。四种基因型(gt)在人类中是致病的。Gt1和gt2只感染人类，而gt3和gt4是人畜共患的，主要感染可能将病毒传播给人类的动物。最近，西方世界出现了gt3感染，可能是由于受污染的输血和食用受污染的食物¹。戊型肝炎的诊断基于检测患者血清中的抗HEV抗体和/或病毒RNA ³。最近，特别是对于没有分子诊断设施的实验室，开发了一种基于检测HEV衣壳蛋白抗原的新测定法(Biologicals)。

HEV是一种准包膜的正义RNA病毒，其表达三个开放阅读框(ORF)：ORF1、ORF2和ORF3¹。ORF1编码ORF1非结构性多蛋白，其包含病毒复制必需的几个功能域。ORF2编码ORF2病毒衣壳蛋白，其参与颗粒装配、与宿主细胞结合并引发中和抗体。ORF3编码参与病毒粒子形态发生和出口的小多功能磷蛋白。尽管HEV在胆汁和粪便中是无包膜病毒，但患者血清和细胞培养产生的颗粒与细胞脂质相关，与甲型肝炎病毒一样⁴，并在其表面呈现ORF3蛋白⁵。

在细胞培养中生长HEV已被证明非常困难⁵。然而，几种HEV菌株已适应细胞培养，包括gt3Kernow C-1菌株，其含有58-aa人S17核糖体蛋白的插入⁶。尽管这些系统已经增加了对HEV生命周期的理解，但它们仍然产生低感染滴度，限制了对病毒蛋白和感染性物质的直接生化分析。值得注意的是，与感染性颗粒相关的ORF2蛋白的确切序列是未知的。此外，免疫电子显微镜从未对颗粒的超微结构进行有力的研究。

发明简述

本发明涉及戊型肝炎病毒ORF2衣壳多肽及其用途。具体地，本发明由权利要求所定义。

发明详述

戊型肝炎病毒(HEV)感染是全世界急性肝炎的主要病因。大约20亿人生活在HEV流行地区并有感染风险。HEV基因组编码3种蛋白质，包括ORF2衣壳蛋白。由于缺乏有效的病毒培养系统，HEV生命周期的详细分析受到阻碍。

发明人用gt3HEV细胞培养产生的颗粒(HEVcc)以及患者血液和粪便样品进行了研究。将样品在碘克沙醇梯度和垫上分级。在体外和人肝嵌合小鼠中进行感染性测定。通过生物化学和蛋白质组学方法分析蛋白质。通过透射电子显微镜分析感染性颗粒。用ELISA测量HEV抗原水平。