[发明专利]抗体-药物复合体的构成成分的检测方法

说明书

本发明涉及检测抗体‑药物复合体的手段、以及通过定量的手段确定抗体‑药物复合体的靶细胞中的靶分子的表达和它们的相互作用来高精度地判定抗体‑药物复合体的有效性的方法。根据该方法，通过使用荧光体集成粒子的免疫染色法使作为抗体‑药物复合体的构成成分的药物和/或作为抗体‑药物复合体的构成成分的抗体可视化，从而可以检测抗体‑药物复合体和其构成成分。

技术领域

本发明主要涉及作为抗体-药物复合体的构成成分的抗体和/或药物的检测方法。

背景技术

癌症是与以心肌梗塞、脑梗塞为代表的血管系统疾病一起各占成人死亡原因一半的疾病。日本人中，例如乳腺癌罹患率低于欧米各国，但近年有增加倾向，1998年超过了胃癌罹患率而成为女性罹患率的第1位。根据最近的报道、即2005年厚生劳动省统计，每年罹患乳腺癌的人数超过了5万人。在全世界范围内，该数字也同样在逐年增加，根据2008年的WHO报告，在男女合计的情况下乳腺癌的罹患率也占第一位，每年罹患人数超过138万人，占女性全部癌症的约23％。

作为癌症的治疗药，以往广泛使用小分子药物，近年开发了数量众多的选择性和治疗效果更好且副作用少的抗体药物，并且已用于临床。另外，最近，兼具小分子药物和抗体药物的优点的抗体-药物复合体(ADC；Antibody-drug-conjugate)药物的开发已经展开并被认为是癌症治疗中有吸引力的开发领域。

抗体-药物复合体具有借助合适的接头将单克隆抗体和小分子药物等药物结合而成的结构。当与在靶细胞表面表达的细胞表面抗原、受体或配体等抗原特异性结合并通过内吞作用被摄入细胞内时，在细胞内的pH环境、酶的作用下，接头、抗体发生分解，药物从抗体中释放出来，从而可以选择性杀伤目标细胞。

为了在将抗体-药物复合体用于临床时构建有效的给药计划，而且为了能够扩大给药对象，期望确定给药后的各时点的抗体-药物复合体的药代动力学。但是，从灵敏度的角度来看，通过以往的方法难以检测抗体-药物复合体。

另外，作为判定抗体-药物复合体的有效性的方法，期望确定与靶细胞的相互作用等信息。例如，为了使抗体-药物复合体对肿瘤显示出药效，需要使抗体-药物复合体的靶分子在患者的肿瘤细胞表面充分表达、进一步通过抗体-药物复合体适当地识别靶分子并相互作用而被摄入细胞内。因此可以说，通过对成为抗体-药物复合体的靶标的生物体物质的表达量进行定量评价，可以有效地确定分子靶标药对每位患者的适用性。

在抗体药物中作为乳腺癌的代表性抗癌剂-曲妥珠单抗(商品名；赫赛汀(Herceptin)注册商标)的有效性的判定方法，广泛使用靶分子HER2蛋白的表达信息分析，作为其方法，例如在临床上广泛使用对靶标生物体物质的蛋白质进行染色的免疫组织染色〔Immunohistochemistry；IHC〕法和对靶标生物体物质的基因进行染色的FISH〔Fluorescence in situ hybridization，荧光原位杂交〕法等。

在此，IHC法是将被检体中所含的HER2蛋白用DAB(3,3'-Diaminobenzidine；3,3’-二氨基联苯胺)染色而进行检测的方法。但是，其判定基准为仅将染色水平设为0～3分的4阶段的粗略判定基准，因此缺乏定量性，进一步地判定基准还受病理医的熟练度影响，在临床上成为问题。

另一方面，FISH法是使用检测17号染色体上的编码HER2蛋白的基因的探针、对该基因进行荧光染色的方法。FISH法虽然为一种定量检查法，但是并不是直接评价HER2蛋白的量和细胞内定位的方法。