[发明专利]用于在酵母中生产重组IL-11的系统和方法

权利要求书

1.产生IL-11的方法，其包括：

将编码重组IL-11的表达载体引入酵母中，其中所述重组IL-11不是融合蛋白的形式；

在诱导IL-11表达的条件下在培养基中培养所述酵母；

将上清液与所述培养基的固体分离；

使所述上清液与足以形成包括沉淀的悬浮液的量的聚乙二醇接触；

在包括变性剂的溶液中溶解所述沉淀，以产生粗IL-11溶液；

降低所述变性剂浓度以产生再折叠的IL-11溶液；

使所述再折叠的IL-11溶液与离子交换介质接触；和

从所述离子交换介质洗脱纯化的IL-11。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述聚乙二醇以约4％(w/v)和约12％(w/v)之间的终浓度提供。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述聚乙二醇以约6％(w/v)和约9％(w/v)之间的终浓度提供。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述聚乙二醇具有约2,000D至约20,000D的平均分子量。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述聚乙二醇具有约4,000D至约12,000D的平均分子量。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述变性剂选自脲、盐酸胍和洗涤剂。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述洗涤剂选自十二烷基硫酸盐和N-十二烷基肌氨酸钠。

8.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中在所述溶解步骤中，所述变性剂为盐酸胍，浓度为约4M至10M。

9.根据权利要求8所述的方法，其中在所述溶解步骤中，所述变性剂为盐酸胍，浓度为约5M至9M。

10.根据权利要求8或9所述的方法，其中所述变性剂是盐酸胍并且被降低至0.7M或更少以产生所述再折叠的IL-11溶液。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中降低所述变性剂浓度的步骤包括在18℃至25℃下温育约一小时，然后降低所述变性剂浓度。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述离子交换介质包括阳离子交换介质。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中降低变性剂浓度的步骤通过稀释所述粗IL-11溶液完成。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中降低变性剂浓度的步骤通过所述粗IL-11溶液的缓冲液交换完成。

15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中产生所述再折叠IL-11溶液的步骤以约0.1mg/mL至约10mg/mL的蛋白质浓度进行。

16.根据权利要求15所述的方法，其中产生所述再折叠IL-11溶液的步骤以小于约2mg/mL的蛋白质浓度进行。

17.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，包括以下另外的步骤：

使所述纯化的IL-11与疏水性相互作用介质接触；和

从所述疏水性相互作用介质洗脱精炼的IL-11，

其中相对于所述纯化的IL-11，所述精炼的IL-11具有降低含量的氧化IL-11。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述疏水性相互作用介质选自丁基、己基、辛基和/或苯基。