[发明专利]改善NK细胞的骨髓归巢的PM21颗粒

说明书

公开了通过使用PM21颗粒将NK细胞引导至骨髓的组合物和方法。

技术领域

本申请要求于2017年2月28日提交的美国临时申请号62/464,747的权益，并且其通过引用整体并入本文。

背景技术

过继性自然杀伤(NK)细胞疗法是一种有前景的用于肿瘤学的新干预方法，包括用于骨髓恶性肿瘤。因此，待过继使用的NK细胞的运输效率是非常重要的。所需要的是能够有效地将NK细胞运输至骨髓的方法。

发明内容

1.本发明公开了涉及将NK细胞运输至骨髓的方法和组合物，包括使NK细胞与PM21颗粒和/或FC21饲养细胞接触。在一个方面，该方法可进一步包括用IL-2、IL-12、IL-18和/或IL-18刺激NK细胞。

2.还公开了治疗骨髓恶性肿瘤或骨髓出生的恶性肿瘤和/或治疗病毒感染(如骨髓相关病毒感染，包括骨髓嗜性病毒感染或对骨髓有不利影响的病毒感染)的方法，其包括使NK细胞与PM21颗粒和/或FC21饲养细胞接触并过继地将NK细胞转移至受试者。在一些方面，PM21颗粒和/或FC21饲养细胞与NK细胞的接触可在NK细胞转移至患者之前发生。在另一方面，PM21颗粒和/或FC21饲养细胞与NK细胞的接触可发生在患者体内。

附图说明

3.并入并且构成本说明书一部分的附图示出多个实施方式并且与说明书一起示出所公开的组合物和方法。

4.图1示出了PM-21颗粒有效且选择性地扩增细胞毒性NK细胞。从白细胞来源分离外周血单核细胞(PBMC)，并在补充有10％FBS、2mM Glutamax和50U/mL IL-2的SCGM中以0.1x10⁶个NK细胞/mL接种。用PM15(□，黑色)或PM21(○，蓝色)颗粒以200μg/mL刺激PBMC27天，每2-3天测试细胞含量，并示出NK细胞扩增的相对倍数(A)和悬浮细胞的百分比(B)。基于NK细胞扩增的第14天数据的累积分析，与PM15颗粒(425±71，N＝35，9个供体)(黑色)相比，PM21颗粒(825±188倍，N＝13，4个供体)(蓝色)对NK细胞扩增更有效(C)。将从缓解的3名AML患者分离的PBMC用PM21颗粒(200μg/mL)培养14天，在具有10％FBS、2mM Glutamax、50U/mL IL-2的SCGM中以0.5x10⁶个NK细胞/mL接种。示出来自原代PBMC的NK细胞扩增(D)和淋巴细胞含量(E)的倍数(CD56⁺CD3^-NK细胞(●，红色)、CD56^-CD3⁺T细胞(■，蓝色)和CD56⁺CD3⁺NKT细胞(▲，黑色))。如前所述将来自患者F021的PBMC培养16天，并分析来自同一患者的对AML肿瘤的自体细胞毒性(F)。扩增用TFL4标记的PM21-NK细胞，并在活动性疾病期间与来自同一患者的AML细胞以指定的E:T比率共孵育(2小时)，并通过流式细胞术分析。使用“单独靶标”对照测定自发死亡的靶细胞的量。一式两份确定每个数据点。

5.图2示出了用PM21颗粒预活化未选择的PBMC诱导体内NK细胞扩增。给NSG小鼠腹膜内注射2x10⁶个未活化的PBMC细胞(A和B)或用PM21颗粒和100U/mL IL-2离体预活化的PBMC(PM21-PBMC)两天(C和D)。所有组中的小鼠每周三次腹膜内接受1000U的IL-2。还每周两次给每组小鼠腹膜内注射400μg的PM21颗粒(B和D)。从第6天开始，每周两次通过连续的颊部出血抽取外周血，并通过流式细胞术分析hCD45⁺人淋巴细胞。基于hCD3、hCD56、hCD19的染色确定NK、T和B细胞量。每个实验组中的左图示出了每μL PB的hNK细胞浓度。右图示出了hNK细胞(○，红色)和T细胞(黑色)作为总hCD45⁺细胞分数的百分比。