[发明专利]免疫调节性大环内酯类的稳定制剂

说明书

本发明涉及液体组合物，其包含至少一种免疫调节性大环内酯化合物和基本上无细胞的血液溶血物。本发明进一步涉及用于制造稳定的免疫调节性大环内酯校准溶液的方法，其包括a)制备包含基本上无细胞的血液溶血物的溶液，b)将预定量的至少一种免疫调节性大环内酯混入所述包含基本上无细胞的血液溶血物的溶液中，且，由此c)制造稳定的免疫调节性大环内酯校准溶液。此外，本发明涉及试剂盒、用途、设备、方法和与其相关的免疫调节性大环内酯化合物校准溶液。

本发明涉及液体组合物，其包含至少一种免疫调节性大环内酯化合物和基本上无细胞的血液溶血物。本发明进一步涉及用于制造稳定的免疫调节性大环内酯校准溶液的方法，其包括a)制备包含基本上无细胞的血液溶血物的溶液，b)将预定量的至少一种免疫调节性大环内酯混入所述包含基本上无细胞的血液溶血物的溶液中，且，由此c)制造稳定的免疫调节性大环内酯校准溶液。此外，本发明涉及试剂盒、用途、设备、方法和与其相关的免疫调节性大环内酯化合物校准溶液。

依维莫司(Eve)、西罗莫司(Sir)和他克莫司(Tac)是大环内酯化合物，其在医药中用作器官移植后的免疫抑制药物(ISD)。这些药物具有狭窄的治疗范围，其中较低水平与治疗不足相关并最终导致器官的排斥，并且另一方面，其中较高水平与对某些器官如肝脏和肾脏的毒性相关。此外，药代动力学和药效动力学参数的患者内和患者间可变性使ISD的平衡剂量复杂。因此，这些药物的治疗药物监测(TDM)已变为通过基于体内浓度控制疗法而不是通过单独的剂量来有效治疗移植患者的必不可少的辅助手段。由于依维莫司、西罗莫司和他克莫司与血流中的红细胞高度结合，推荐的定量基质是全血。

为了测定全血中的Eve、Sir和Tac，广泛范围的TDM测试是商业可得的，通常作为自动化分析仪的免疫测定，而且也作为LC-MS/MS测试。在自动化体外诊断(IVD)平台上运行的测试的一个重要方面在于，在LC-MS/MS情况下的所有所需的试剂，诸如免疫试剂、对照、校准物和内部标准品，理想地作为稳定和即用的溶液提供。这些溶液可以放置在仪器的板上更长的时间段，其提供不需要用户交互的工作流程。然而，当涉及化学不稳定的试剂时，使用作为冻干物的试剂是必要的，但这通过需要手动处理步骤用于重构而妨碍工作流程。手动处理步骤生成额外成本，并且还提供误差的来源。此外，重构的试剂通常显示短保质期并且必须由新鲜制备的溶液代替。

用于基于免疫化学的IVD平台的测定试剂的典型溶剂是水。溶解于基于水的溶剂(即缓冲液)中的试剂确保与测定中涉及的生物分子(诸如抗体或其他蛋白)完全相容，确保其完整的三维结构。另一方面，有机溶剂可以根据其量引起生物分子的部分或全部解折叠和失活，因此干扰免疫测定。用于IVD的LC-MS/MS方法中的一些还需要用于预分析的基于水的溶液和试剂(例如，如EP 2 003 455 A1中所教导的具有富集工作流程的MS方法的内部标准品)。在LC-MS/MS预分析中，在其中分析物的释放和/或基质组分的除去是必需的情况下，用释放试剂处理样品(血清、血浆或全血)。

然而，与有机溶剂(例如甲醇、乙腈)中的溶液相比，Eve、Sir和Tac的水性制剂在实验室冰箱中(2-8℃)和分析仪的板上(4-12℃)使用的储存温度下通常不能长时间段稳定。从文献(例如EP 2 402 350 A1)已知，大环内酯类Eve、Sir和Tac具有差的水溶性并且由于其酯键的溶剂分解而在溶液中不稳定，导致生物活性的丧失。因此，无有机溶剂的Eve、Sir和Tac的水性制剂，包括基于血液的样品，通常在范围为-20至-80℃的非常低温度下储存，以保持它们稳定并可用于IVD中更长的时间段；否则溶液只能稳定短时间段(2-8℃下1-6周)。现有技术的储存建议概述于表1中。