[发明专利]包含N-酰基-X-谷氨酰胺二肽的培养基

说明书

本发明涉及用于生物技术生产方法的改良培养基、采用该改良培养基的方法和从该方法中获得的产物。本发明的细胞培养基包含来自N‑酰化二肽酰基‑X‑Q的组中的L‑谷氨酰胺和来自其他谷氨酰胺源Q源的组中的L‑谷氨酰胺，其限定的摩尔比为R＝n(酰基‑X‑Q)/n(Q源)；其中X定义为L‑氨基酸；其中Q定义为通过酰胺键与L‑氨基酸X连接的L‑谷氨酰胺；其中酰基定义为通过酰胺键连接到L‑氨基酸X的氨基末端的C₁‑C₇‑酰基部分；其中R定义为0.03至20；其中n(酰基‑X‑Q)是在培养基中的所述N‑酰化二肽酰基‑X‑Q的组中包含的L‑谷氨酰胺的物质总量；和其中n(Q源)是在培养基中的所述其他谷氨酰胺源Q源的组中包含的L‑谷氨酰胺的物质总量。其他L‑谷氨酰胺源(Q源)的组中的成分选自：游离的L‑谷氨酰胺、二肽Y‑Q或其混合物，其中Y定义为20种遗传编码的L‑氨基酸中的一种，其中Q定义为通过酰胺键与L‑氨基酸Y连接的L‑谷氨酰胺，其中在二肽Y‑Q中连接Y和Q的酰胺键是普通的主链酰胺键，其涉及氨基酸Y的羧基末端和谷氨酰胺Q的氨基末端。

发明领域

本发明涉及生物技术生产方法。更具体地，本发明涉及用于生物技术生产方法的改良培养基、采用该改良培养基的方法和使用该改良培养基从该方法中获得的产物。

发明背景

生物技术方法广泛用于生物产物的生产。这些方法通常涉及在培养细胞生长和产物形成所允许的条件下在培养基中培养细胞。在生物技术生产中有用的细胞为细菌细胞、真菌细胞、酵母细胞和动物或植物来源的细胞。

动物细胞培养长期以来用于生物产物的生产，所述生物产物例如治疗性蛋白质、多肽、肽或其他生物分子，例如治疗性多糖。在这种细胞培养方法中，将通常是经遗传修饰以产生所需产物的动物细胞在液体、固体或半固体培养基中进行培养，用于细胞增殖和产物形成。细胞培养的一个显著优势是动物细胞和植物细胞能够对初级产物进行翻译后修饰(例如多肽的折叠和翻译后修饰)这一事实。

在生物技术生产方法中，特别是在动物细胞培养中，细胞培养条件的控制和优化对于细胞增殖和产物形成是至关重要的。一个决定性因素是培养基组成。最终的细胞培养产物的浓度和品质在很大程度上取决于培养基组成。就所需的营养素组合物和培养条件而言，动物和植物细胞培养特别苛刻。所需的营养素不仅包括基础碳源、基础氮源和基础能源(例如糖和氨)，还包括更复杂的营养素(例如必需氨基酸)，并且可能需要维生素。为此，用复杂的营养素组合物(例如血清)补充动物细胞培养基已经用于为动物细胞提供各种各样的营养。然而，监管和安全问题以及可用的血清来源的异质性问题已经引起工业界努力从工业细胞培养方法中消除血清和其他非成分确定的培养基。然而，在无血清培养基中生长的细胞培养物经常表现出营养不良。为此，已经进行了很多努力去鉴定复杂培养基中的那些营养成分以及它们的最佳浓度，这是在细胞培养中得到令人满意的生长和蛋白质形成所需要的。