[发明专利]利用细胞内在性的DNA修饰酶将靶向化的DNA的核酸碱基特异地替换的、细胞的核酸序列的替换方法、以及用于该方法的分子复合体

权利要求书

1.一种方法，其为改变细胞所具有的DNA的靶向部位的方法，其包括以下的工序：

用诱导该细胞中内在的DNA修饰酶的因子刺激该细胞的工序，以及

使可与选择出的DNA中的靶核苷酸序列特异性地结合的核酸序列识别模块与、DNA修饰酶结合模块进行结合而得到的复合体，与该DNA进行接触，从而使得该靶向部位的1个以上的核苷酸缺失或替换为其它的1个以上的核苷酸，或者将1个以上的核苷酸插入于该靶向部位的工序。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，在不切断所述DNA的至少一条链的状态下进行所述靶向部位的改变。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述核酸序列识别模块选自由Cas的至少1种DNA切断能力失活了的CRISPR-Cas系统、锌指基序、TAL效应物以及PPR基序组成的组。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，所述核酸序列识别模块是Cas的至少1种DNA切断能力失活了的CRISPR-Cas系统。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，所述DNA修饰酶结合模块选自由针对DNA修饰酶的抗体、肽适体以及核酸适体组成的组。

6.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，所述DNA修饰酶结合模块是选自由Vif、Bet蛋白质、TopoIIβ、IQGAP2以及ZNF335以及它们的片段组成的组中的至少1种。

7.根据权利要求1～6中任一项所述的方法，其中，所述DNA修饰酶结合模块的靶酶是脱氨酶。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述脱氨酶是属于APOBEC家族的蛋白质。

9.根据权利要求7或8所述的方法，其中，将核酸序列识别模块和DNA修饰酶结合模块结合而得到的复合体，进一步结合了碱基切除修复的抑制因子。

10.根据权利要求1～9中任一项所述的方法，其中，诱导所述DNA修饰酶的因子是选自由干扰素、琥珀酸脱氢酶阻碍剂以及低氧条件组成的组中的1个以上。

11.根据权利要求1～10中任一项所述的方法，其中，通过将编码该复合体的核酸导入于所述细胞，培养该细胞而在细胞内表达该复合体，从而进行所述DNA与所述复合体的接触。

12.根据权利要求1～11中任一项所述的方法，其中，用诱导DNA修饰酶的因子刺激细胞，是通过在该因子的存在下培养该细胞从而进行的。

13.根据权利要求1～12中任一项所述的方法，其中，所述细胞是脊椎动物细胞。

14.根据权利要求13所述的方法，其中，所述脊椎动物细胞是哺乳类动物细胞。

15.根据权利要求1～14中任一项所述的方法，其中，所述DNA是双链DNA。

16.一种复合体，其为通过将可与DNA中的靶核苷酸序列特异性地结合的核酸序列识别模块和DNA修饰酶结合模块结合而得到的复合体，该核酸序列识别模块是Cas的至少1种DNA切断能力失活了的CRISPR-Cas系统，使得该靶向部位的1个以上的核苷酸缺失或替换为其它的1个以上的核苷酸，或者将1个以上的核苷酸插入于该靶向部位。

17.一种核酸，其编码权利要求16所述的复合体。

18.一种DNA的靶向部位的改变剂，其含有权利要求16所述的复合体或者权利要求17所述的核酸。

19.一种方法，其为改变细胞所具有的双链DNA的靶向部位的方法，其包括以下的工序：

用诱导该细胞中内在的DNA修饰酶的因子刺激该细胞的工序，以及

通过使可与选择出的双链DNA中的靶核苷酸序列特异性地结合的核酸序列识别模块与该双链DNA进行接触，从而使得该靶向部位的1个以上的核苷酸缺失或替换为其它的1个以上的核苷酸，或者将1个以上的核苷酸插入于该靶向部位的工序。