[发明专利]抗PD-L1/抗PD-1天然抗体结构样异源二聚体形式双特异抗体及其制备

权利要求书

1.一种异源二聚体形式的双特异抗体，其包含能与PD-L1特异性结合的第一个抗原结合功能区和能与PD-1特异性结合的第二个抗原结合功能区，其中所述双特异抗体包含通过一个或多个二硫键链间连接的第一Fc链及第二Fc链，该第一Fc链和第二Fc链通过共价键或连接体分别连接到PD-L1抗原结合功能区和PD-1抗原结合功能区上；或者该第一Fc链和第二Fc链通过共价键或连接体分别连接到PD-1抗原结合功能区和PD-L1抗原结合功能区上；并且第一Fc链和第二Fc链的序列分别显示于SEQ ID NO: 8和SEQ ID NO: 14中，所述第一Fc链与第二Fc链更倾向于互相形成异源二聚体而不倾向于各自形成同源二聚体，

其中氨基酸位置根据Kabat EU指数编号系统编号。

2.如权利要求1所述的异源二聚体形式的双特异抗体，其中Fc链来源于IgG。

3.如权利要求1-2中任一项所述的异源二聚体形式的双特异抗体，其中PD-L1和PD-1抗原结合功能区是Fab片段或scFv片段。

4.如权利要求1-3中任一项所述的异源二聚体形式的双特异抗体，其中PD-L1和PD-1抗原结合功能区都是Fab片段。

5.如权利要求1-3中任一项所述的异源二聚体形式的双特异抗体，其中PD-L1和PD-1抗原结合功能区一个是Fab片段，另一个是scFv。

6.如权利要求3-5中任一项所述的异源二聚体形式的双特异抗体，其Fab片段包含不同的第一重链可变区及第二重链可变区，以及不同的第一轻链可变区及第二轻链可变区。

7.如权利要求1-6中任一项所述的异源二聚体形式的双特异抗体，其中第一Fc链及其相连接的PD-L1抗原结合功能区和第二Fc链及其相连接的PD-1抗原结合功能区，或者第一Fc链及其相连接的PD-1抗原结合功能区和第二Fc链及其相连接的PD-L1抗原结合功能区，在单独存在并且同时存在还原剂时其形成同源二聚体的重量比例均低于50%。

8.如权利要求1-7中任一项所述的异源二聚体形式的双特异抗体，其中所述双特异抗体包含抗PD-L1抗体半抗体和抗PD-1抗体半抗体，其中：

所述抗PD-L1抗体半抗体包含：如SEQ ID NO: 2所示的轻链可变区；SEQ ID NO: 4所示的轻链恒定区；如SEQ ID NO: 6所示的重链可变区；和如SEQ ID NO: 8所示的重链恒定区；并且

所述抗PD-1抗体半抗体包含：SEQ ID NO: 16所示的轻链可变区；如SEQ ID NO: 4所示的轻链恒定区；如SEQ ID NO:18所示的重链可变区；和如SEQ ID NO: 14所示的重链恒定区。

9.一种分离的多核苷酸，其编码如权利要求1-8中任一项所述的异源二聚体形式的双特异抗体，其中所述多核苷酸的序列选自：SEQ ID NO：1、3、5、7、13、15和17。

10.一种重组表达载体，其包含权利要求9所述的分离的多核苷酸。

11.如权利要求10所述的重组表达载体，其中表达载体为基于pCDNA改造得到的质粒载体X0GC。

12.一种宿主细胞，其包含权利要求9所述的分离的多核苷酸，或权利要求10或11所述的重组表达载体，所述细胞为HEK293T、HEK293F、HEK293E、CHO-S、CHO-dhfr^-、CHO/DG44、ExpiCHO、BL21，BL21(DE3)，Rosetta，Origami、毕赤酵母，酿酒酵母，乳酸克鲁维亚酵母，多形汉逊酵母、High5或SF9细胞。