[发明专利]使用3D微流体细胞培养装置评价肿瘤细胞球体的方法

权利要求书

1.一种用于在三维微流体装置中评价肿瘤细胞球体的方法，所述方法包含：

自酶处理的肿瘤样品获得肿瘤球体，

使所述肿瘤球体的第一等分试样悬浮于生物相容性凝胶中；

使所述肿瘤球体的第二等分试样悬浮于生物相容性凝胶中；

将在生物相容性凝胶中的所述肿瘤球体的所述第一等分试样放入第一个三维装置中，

使所述第一等分试样与对死细胞具有选择性的第一荧光团染料接触，所述第一荧光团染料在结合至死细胞时发射第一波长的荧光，

使所述第一等分试样与对活细胞具有选择性的第二荧光团染料接触，所述第二荧光团染料在结合至活细胞时发射不同于所述第一波长的第二波长的荧光，

测量由所述第一等分试样中的所述第一荧光团染料和所述第二荧光团染料各自发射的总荧光，

在第二个三维装置中培养所述第二等分试样，

使所述第二等分试样与所述第一荧光团染料接触，

使所述第二等分试样与所述第二荧光团染料接触，其中所述第二等分试样与所述第一荧光团染料和所述第二荧光团染料的接触是在所述第一等分试样与所述第一荧光团染料和所述第二荧光团染料接触之后至少24小时进行，

测量由所述第二等分试样中的所述第一荧光团染料和所述第二荧光团染料各自发射的总荧光，

其中所述等分试样中的每一种中活细胞与死细胞的比率增加或减少能够被评估。

2.根据权利要求1所述的方法，其中使用摄像机，优选地在至少2×、至少3×、至少4×或更高分辨率下，从每一个三维装置的正上方或正下方测量由所述第一荧光团染料和所述第二荧光团染料各自发射的总荧光，并且优选地其中所述三维装置被放在能移动的平台上，由此允许所述摄像机捕捉每一等分试样中的总荧光。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中在所述第二等分试样培养期间，使所述第二等分试样与至少一种测试化合物接触，并且其中所述第二等分试样的所述培养在所述测试化合物存在下进行至少24小时、至少两天、至少三天、至少四天、至少五天或至少6天。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其中在所述第二等分试样培养期间，使所述第二等分试样与至少两种测试化合物接触，并且其中所述第二等分试样的所述培养在所述测试化合物存在下进行至少24小时、至少两天、至少三天、至少四天、至少五天或至少6天，并且优选地其中所述测试化合物中的至少一种是免疫检查点抑制剂。

5.根据权利要求1至4中任一权利要求所述的方法，其中所述第一等分试样和所述第二等分试样各自含有在约15个与30个之间的球体、优选地在约20个与25个之间的球体。

6.根据权利要求1至5中任一权利要求所述的方法，其中所述第一个三维装置是第一个三维微流体装置并且所述第二个三维装置是第二个三维微流体装置，并且任选地，在所述第一个三维微流体装置中培养所述第一等分试样，所述培养在使所述第一等分试样与所述第一荧光团染料和所述第二荧光团染料接触之前进行不到6小时、不到3小时、不到2小时且甚至不到1小时。

7.根据权利要求6所述的方法，其中在所述第一等分试样与所述第一荧光团染料和所述第二荧光团染料接触之前，未在所述第一个三维微流体装置中培养所述第一等分试样。

8.根据权利要求1至7中任一权利要求所述的方法，其中所述酶是胶原蛋白酶。