[发明专利]自引导整合构建体(SGIC)

权利要求书

1.一种自引导整合构建体，其包含：

-引导RNA表达盒，和

-另外的多核苷酸元件，

其中所述引导RNA表达盒能够表达功能性引导RNA或其部分，所述功能性引导RNA或其部分是对靶基因组中的靶序列特异的，其中包含所述引导RNA表达盒和所述另外的多核苷酸元件的所述自引导整合构建体的部分在其5'末端侧接第一多核苷酸并在其3'末端侧接第二多核苷酸，并且其中所述第一和第二多核苷酸与所述靶基因组中所述靶序列侧翼的序列具有序列同一性；前提条件是所述自引导整合构建体不包含编码多核苷酸引导的基因组编辑酶的表达构建体。

2.一种自引导整合构建体，其包含：

-引导RNA表达盒，和任选地，

-另外的多核苷酸元件，其中所述引导RNA表达盒能够表达功能性引导RNA或其部分，所述功能性引导RNA或其部分是对靶基因组中的靶序列特异的，其中包含所述引导RNA表达盒和任选地所述另外的多核苷酸元件的所述自引导整合构建体的部分在其5'末端侧接第一多核苷酸并在其3'末端侧接第二多核苷酸，其中所述第一和第二多核苷酸与所述靶基因组中所述靶序列侧翼的序列具有序列同一性，以及其中所述功能性引导RNA或其部分由所述引导RNA表达盒上的多核苷酸编码，并且所述多核苷酸可操作地连接至RNA聚合酶II启动子、至RNA聚合酶III启动子以及自加工核酶或至单亚基DNA依赖性RNA聚合酶启动子，优选病毒单亚基DNA依赖性RNA聚合酶启动子，更优选T3、SP6、K11或T7 RNA聚合酶启动子；前提条件是所述自引导整合构建体不包含编码多核苷酸引导的基因组编辑酶的表达构建体。

3.一种自引导整合构建体，其包含：

两种或更多种多核苷酸，所述两种或更多种多核苷酸能够彼此重组以产生引导RNA表达盒，以及任选地另外的多核苷酸元件，

其中所述引导RNA表达盒能够表达功能性引导RNA或其部分，其中所述功能性引导RNA或其部分是对靶基因组中的靶序列特异的，其中包含所述引导RNA表达盒和任选地所述另外的多核苷酸元件的所述自引导整合构建体的部分在其5'末端侧接第一多核苷酸并在其3'末端侧接第二多核苷酸，并且其中所述第一和第二多核苷酸与所述靶基因组中所述靶序列侧翼的序列具有序列同一性；前提条件是所述自引导整合构建体不包含编码多核苷酸引导的基因组编辑酶的表达构建体。

4.根据实施方式1-3中任一项所述的自引导整合构建体，其中所述自引导整合构建体是线性的自引导整合构建体。

5.一种组合物，所述组合物包含两种或更多种多核苷酸构件，其中这些构件彼此具有序列同一性以允许它们在体内重组，诸如在宿主细胞中重组，以产生根据实施方式1或2所述的单个自引导整合构建体或以产生根据实施方式4所述的线性自引导整合构建体。

6.根据实施方式1-4所述的自引导整合构建体或根据实施方式5所述的组合物，其中所述另外的多核苷酸元件是控制序列、标记、目的基因、或破坏构建体。

7.一种包含实施方式1-4中任一项所定义的自引导整合构建体的组合物，或根据实施方式5所述的组合物，其优选包含自引导整合构建体文库，所述组合物优选地还包含功能性多核苷酸引导的基因组编辑酶或能够表达功能性多核苷酸引导的基因组编辑酶的表达构建体。

8.一种宿主细胞，其包含实施方式1-4或6中任一项所定义的自引导整合构建体或根据实施方式5所述的组合物。

9.根据实施方式8所述的宿主细胞，其还包含功能性多核苷酸引导的基因组编辑酶，优选地功能性多核苷酸引导的异源基因组编辑酶，或者还包含表达构建体，所述表达构建体能够表达功能性多核苷酸引导的基因组编辑酶，优选功能性多核苷酸引导的异源基因组编辑酶。

10.根据实施方式8或9所述的宿主细胞，其中所述自引导整合构建体整合到所述基因组中所述第一和第二多核苷酸与所述靶基因组中所述靶序列侧翼的序列具有序列同一性的位点处。