[发明专利]调节补体依赖性细胞溶解效应子功能的修饰的人IGM恒定区

说明书

本公开提供了经修饰的人IgM重链恒定区，所述经修饰的人IgM重链恒定区例如在Cμ3结构域中包含一个或多个氨基酸取代，其中相对于相应的野生型人IgM抗体，包含所述经修饰的IgM恒定区和对靶抗原有特异性的重链可变区的经修饰的人IgM抗体表现出对表达所述靶抗原的细胞的补体依赖性细胞毒性(CDC)降低。

相关申请的交叉引用

本申请要求2017年4月7日提交的美国临时专利申请序列号62/483,087的权益，该临时专利申请通过引用整体并入本文。

背景技术

补体依赖性细胞毒性是抗体用于使先天免疫系统的组分破坏入侵微生物的效应子功能。治疗性抗体可以使用补体系统以使补体系统攻击被抗体靶向的细胞，例如肿瘤细胞。通过第一组分C1q与IgG的Fc区或与IgM的Fc Mu区的结合而触发补体级联。抗体六聚化导致六聚体C1q复合物的形成，这进一步触发下游补体组分并且以膜攻击复合物(MAC)的形成而结束，膜攻击复合物通过细胞膜穿孔和引起的渗透性休克导致细胞死亡。IgM同种型的抗体是多聚体(五聚体和六聚体)，并且特别适合C1q的结合和多聚化。实际上，IgM抗体可以比相应的IgG抗体好30至100倍地固定补体。

然而，对于那些使用IgM抗体使细胞表面受体多聚化以影响下游信号传导的适应症，并不总是希望保留这种强大的补体结合能力。例如，IgM抗体可以用于通过接合TNF受体超家族成员如CD40、OX40或GITR而激活T细胞。在每种情况下，多聚化驱动的下游信号传导可用于引起强大的激动剂活性和T细胞增殖。然而，如果IgM抗体的补体固定活性保持完整，则它可能潜在地抵消IgM抗体对这些靶的激动剂活性。因此，本领域需要鉴定可以减少或消除补体结合和所引起的补体依赖性细胞毒性(CDC活性)的IgM重链恒定区突变。

已经鉴定了小鼠IgM中增强或降低CDC活性的突变。参见，例如，Arya,S.等，J.Immunol.152:1206-1212(1994)，Wright,J,F.等，J.Biol.Chem.263:11221-11226(1988)，及Wright,J.F.等，J.Biol.Chem.265:10506-10513(1989)。本领域仍然需要鉴定和表征CDC活性改变的经修饰的人IgM抗体。

发明内容

本公开提供了一种经修饰的人IgM恒定区，其相对于野生型人IgM恒定区包括一个或多个氨基酸取代，其中至少一个氨基酸取代位于Cμ3结构域中从SEQ ID NO:1的T302到SEQ ID NO:1的K322范围的位置，并且其中包括所述经修饰的IgM恒定区和对靶抗原有特异性的重链可变区的经修饰的IgM抗体相对于相应的野生型人IgM抗体，表现出对表达所述靶抗原的细胞的补体依赖性细胞毒性(CDC)降低。

在某些方面，所述经修饰的人IgM恒定区包括位于SEQ ID NO:1的氨基酸T302、C303、T304、V305、T306、H307、T308、D309、L310、P311、S312、P313、L314、K315、Q316、T317、I318、S319、R320、P321和/或K322处的至少一个氨基酸取代。例如，所述经修饰的人IgM恒定区可以包括位于SEQ ID NO:1的位置L310处、SEQ ID NO:1的位置P311处、SEQ ID NO:1的位置P313处、SEQ ID NO:1的位置K315处或其任何组合处的至少一个氨基酸取代。

在某些方面，至少一个氨基酸取代可以位于SEQ ID NO:1的位置L310处，例如，SEQID NO:1的L310可以被丙氨酸(L310A)、丝氨酸(L310S)、天冬氨酸(L310D)或甘氨酸(L310G)取代。在某些方面，SEQ ID NO:1的L310可以被丙氨酸(L310A)取代，例如，所述经修饰的IgM恒定区可以包括SEQ ID NO:15。在某些方面，SEQ ID NO:1的L310可以被天冬氨酸(L310D)取代，例如，所述经修饰的IgM恒定区可以包括SEQ ID NO:23。