[发明专利]稳定的三维血管和形成其的方法

权利要求书

1.一种用于产生稳定的三维血管的方法，其包括：

a)在基质上培养编码ETV2转录因子的外源核酸的内皮细胞，在培养条件下所述内皮细胞瞬时表达所述ETV2转录因子，以诱导血管形成，其中培养步骤a)在不存在支架或血管周围支持物的情况下进行；

b)进一步包括将步骤a)的所述细胞再培养一段时间，其中所述进一步培养是在所述细胞不表达所述ETV2转录因子的条件下进行；和

c)分离所述稳定的三维血管。

2.权利要求1所述的方法，其中所述内皮细胞表达所述ETV2转录因子至少3-4周。

3.权利要求2所述的方法，其中所述进一步培养至少进行一周。

4.权利要求1所述的方法，其中所述基质包括层粘连蛋白、巢蛋白和胶原的组合。

5.权利要求4所述的方法，其中所述基质包含：

组合浓度为5.25mg/mL的层粘连蛋白和巢蛋白；和

0.2mg/mL的胶原蛋白IV。

6.权利要求1所述的方法，其中所述基质是Matrigel。

7.权利要求1所述的方法，其中所述内皮细胞包括人脐静脉内皮细胞(HUVEC)、脂肪来源的内皮细胞或器官特异性内皮细胞。

8.权利要求7所述的方法，其中所述器官特异性内皮细胞选自心脏、肌肉、肾、睾丸、卵巢、淋巴、肝、胰腺、脑、肺、骨髓、脾、大肠和小肠。

9.权利要求1所述的方法，其中所述培养步骤包括在无血清培养基中培养所述内皮细胞至少7天。

10.权利要求9所述的方法，其中所述在无血清培养基中的培养是在低于大气氧气分压下进行。

11.权利要求10所述的方法，其中所述氧气分压为5％。

12.一种通过权利要求1所述的方法生产的稳定的三维血管。

13.一种在不存在周细胞、灌注和支架的情况下，能够在体外和体内自主形成三维血管网络的稳定的三维血管，其中所述稳定的三维血管包含具有至少一个连续的重编程内皮细胞层的管状结构，其中所述重编程内皮细胞包含编码ETV2的外源核酸序列。

14.一种三维血管网络，其由权利要求13所述的稳定的三维血管形成。

15.权利要求13所述的稳定的三维血管，其中所述稳定的三维血管具有功能至少2个月。

16.权利要求13所述的稳定的三维血管或权利要求14所述的稳定的三维血管网络用于制备用于促进受试者中血管形成的药物的用途，其中所述药物被制备成向所述受试者施用。

17.权利要求16所述的用途，其中所述施用包括将所述稳定的三维血管植入所述受试者中，以在所述受试者中形成功能性三维血管网络。

18.权利要求17所述的用途，其中所述功能性三维血管网络包括毛细血管、小动脉、小静脉或淋巴管。

19.一种使类器官血管化的方法，其包括将所述类器官和包含编码ETV2转录因子的外源核酸的内皮细胞在基质上一起培养，在培养条件下所述内皮细胞瞬时表达所述ETV2转录因子，以在不存在周细胞、灌注和支架的情况下诱导血管形成。

20.权利要求19所述的方法，其中所述基质包括层粘连蛋白、巢蛋白、胶原或其组合。