[发明专利]用于在酵母中生产植物大麻素和植物大麻素类似物的方法和细胞系

权利要求书

1.一种生产植物大麻素或植物大麻素类似物的方法，所述方法包括：

提供酵母细胞，所述酵母细胞包括编码聚酮化合物合成酶的第一多核苷酸和编码胞质异戊烯基转移酶的第二多核苷酸，其中：

所述聚酮化合物合成酶用于由丙二酰基辅酶A生产至少一种前体化学物质，所述前体化学物质具有结构I：

其中，在结构I上，R1是链长为1、2、3、4或5个碳的烷基，R2是H、羧基或甲基，并且R3是H、羧基或甲基；并且

所述胞质异戊烯基转移酶用于使所述至少一种前体化学物质异戊烯化，提供至少一个种类的植物大麻素或植物大麻素类似物；和

使所述酵母细胞繁殖，用于提供酵母细胞培养物。

2.根据权利要求1所述的方法，其中：

所述酵母细胞包括编码己酰基合成酶的第三多核苷酸；

所述聚酮化合物合成酶包括来自大麻的OAS酶；并且

使所述酵母细胞繁殖包括使所述酵母细胞在包括己酸的营养制剂中繁殖。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述酵母细胞不包括大麻聚酮化合物环化酶，并且所述至少一个种类的植物大麻素或植物大麻素类似物包括脱羧的植物大麻素或植物大麻素类似物。

4.根据权利要求2或3中任一项所述的方法，其中所述第一多核苷酸包括用于来自大麻的所述OAS酶的编码序列，所述OAS酶的一级结构与由SEQ ID NO:45的碱基3841至4995限定的阅读框编码的蛋白质具有80％和100％之间的氨基酸残基序列同源性。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述第一多核苷酸与SEQ ID NO:45的碱基3841至4995具有80％和100％之间的碱基序列同源性。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中R1是链长为3个碳的烷基，R2是H，并且R3是H。

7.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中R1是链长为3个碳的烷基，R2是羧基，并且R3是H。

8.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中R1是链长为3个碳的烷基，R2是甲基，并且R3是H。

9.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中R1是链长为3个碳的烷基，R2是羧基，并且R3是甲基。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述聚酮化合物合成酶包括来自盘基网柄菌的DiPKS聚酮化合物合成酶。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述第一多核苷酸包括用于所述DiPKS聚酮化合物合成酶的编码序列，所述DiPKS聚酮化合物合成酶的一级结构与由SEQ ID NO:46的碱基535至9978限定的阅读框编码的蛋白质具有80％和100％之间的氨基酸残基序列同源性。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述第一多核苷酸与SEQ ID NO:46的碱基535至9978具有80％和100％之间的碱基序列同源性。

13.根据权利要求10至12中任一项所述的方法，其中所述至少一种前体化学物质在R2处包括甲基，并且所述至少一个种类的植物大麻素或植物大麻素类似物包括甲基化的植物大麻素类似物。

14.根据权利要求10所述的方法，其中：

所述DiPKS聚酮化合物合成酶包括影响C-Met结构域的活性位点的突变，用于减轻所述至少一种前体化学物质的甲基化，使得所述至少一种前体化学物质包括其中R2是甲基并且R3是H的第一前体化学物质，和其中R2是H并且R3是H的第二前体化学物质；并且

所述至少一个种类的植物大麻素或植物大麻素类似物包括甲基化的植物大麻素类似物和未甲基化的植物大麻素。