[发明专利]包含基因编辑多位点的核酸构建体及其用途在审
| 申请号： | 201880026672.6 | 申请日： | 2018-02-22 |
| 公开（公告）号： | CN110651046A | 公开（公告）日： | 2020-01-03 |
| 发明（设计）人： | 西科·汉斯·波普马;张迪 | 申请（专利权）人： | 艾欧生物科学公司 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;A61K48/00 |
| 代理公司： | 11262 北京安信方达知识产权代理有限公司 | 代理人： | 武晶晶 |
| 地址： | 美国宾夕*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 内切核酸酶 多基因 位点 多核苷酸构建体 宿主细胞基因组 基因插入 宿主细胞 供体 外源 上游 | ||
1.一种用于在插入位点处插入基因组中的基因编辑多位点(GEMS)构建体，其中所述GEMS构建体包含：
侧翼插入序列，其中所述侧翼插入序列中的每一个与所述插入位点处的基因组序列同源；以及
所述侧翼插入序列之间的GEMS序列，其中所述GEMS序列包含多个核酸酶识别序列，其中所述多个核酸酶识别序列中的每一个包含指导靶序列和前间区序列邻近基序(PAM)序列，其中在所述GEMS构建体在所述插入位点处插入后，所述指导靶序列与指导多核苷酸结合。
2.如权利要求1所述的GEMS构建体，其中所述GEMS构建体与SEQ ID NO:2或84所示的序列至少95％相同。
3.如权利要求2所述的GEMS构建体，其中所述GEMS构建体与所述SEQ ID NO:2或84的序列同一性通过BLASTN计算。
4.如权利要求1所述的GEMS构建体，其中所述指导多核苷酸包含指导RNA。
5.如权利要求1所述的GEMS构建体，其中所述多个核酸酶识别序列包括至少三个核酸酶识别序列。
6.如权利要求1所述的GEMS构建体，其中所述多个核酸酶识别序列包括至少五个核酸酶识别序列。
7.如权利要求1所述的GEMS构建体，其中所述多个核酸酶识别序列包括至少七个核酸酶识别序列。
8.如权利要求1所述的GEMS构建体，其中所述多个核酸酶识别序列包括至少十个核酸酶识别序列。
9.如权利要求1所述的GEMS构建体，其中所述多个核酸酶识别序列包括多于十个核酸酶识别序列。
10.如权利要求1-9中任一项所述的GEMS构建体，其中第一核酸酶识别序列的序列不同于第二核酸酶识别序列的序列。
11.如权利要求10所述的GEMS构建体，其中所述指导靶序列在所述第一核酸酶识别序列与所述第二核酸酶识别序列之间不同。
12.如权利要求1-11中任一项所述的GEMS构建体，其中所述多个核酸酶识别序列中的每一个包含与所述多个核酸酶识别序列中的另一个不同的序列。
13.如权利要求1-12中任一项所述的GEMS构建体，其中所述多个核酸酶识别序列中的所述指导靶序列中的每一个与所述多个核酸酶识别序列中的所述指导靶序列中的另一个不同。
14.如权利要求1-13中任一项所述的GEMS构建体，其中所述指导靶序列的长度为约17至约24个核苷酸。
15.如权利要求14所述的GEMS构建体，其中所述指导靶序列的长度为20个核苷酸。
16.如权利要求1-15中任一项所述的GEMS构建体，其中所述指导靶序列富含GC。
17.如权利要求16所述的GEMS构建体，其中所述指导靶序列具有约40％至约80％的G和C核苷酸。
18.如权利要求1-15中任一项所述的GEMS构建体，其中所述指导靶序列具有少于40％的G和C核苷酸。
19.如权利要求16所述的GEMS构建体，其中所述指导靶序列具有多于80％的G和C核苷酸。
20.如权利要求1-19中任一项所述的GEMS构建体，其中所述多个核酸酶识别序列中的至少一个是Cas9核酸酶识别序列。
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