[发明专利]新型肽及其在诊断中的应用

说明书

提供了用于诊断CagA+幽门螺杆菌感染或预测胃癌风险的新型肽。所述肽以高特异性和敏感度结合来自CagA+幽门螺杆菌患者的抗体，并且可以例如在诊断试剂盒中使用。

技术领域

本发明涉及来自幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)的CagA蛋白的新型肽。该肽可用于细菌感染的改进的预防、诊断和治疗以及胃癌风险的评估。

背景技术

幽门螺杆菌是一种通常在胃中发现的细菌。一些幽门螺杆菌(H.pylori)菌株携带编码毒力因子的CagA(cytotoxicity-associated antigen A，细胞毒性相关抗原A)基因。CagA基因编码作为细菌癌蛋白的1140至1180-氨基酸蛋白CagA，该细菌癌蛋白在感染部位移位到胃上皮细胞中。在移位后，其会影响上皮细胞的细胞内信号通路。

携带CagA基因的幽门螺杆菌细菌与胃癌发展的风险增加相关，而且抗CagA抗体的存在与未来胃癌风险的增加相关。早期检测到CagA+幽门螺杆菌感染可促使癌症存活期延长，因为在被感染的个体中消除感染降低了胃癌的风险。因此，识别携带CagA+幽门螺杆菌的个体的方法可以用于诊断高胃癌风险，并因此有助于预防胃癌的发展。

但是，针对CagA+幽门螺杆菌感染的现有的血清学方法在临床上并不起作用，主要是因为这些方法的特异性不够。即使在未感染幽门螺杆菌的个体中，或在感染缺乏CagA的幽门螺杆菌菌株的个体中，也存在表明对CagA具有广泛的抗体活性的大量的假阳性样本。因此，特异性和敏感度不足以用于临床上的有效诊断测试(Yamaoka et al,J ClinMicrobiol 1998:36:3433；Yamaoka et al,Gastroenterology 1999:117:745；Figueiredoet al,J Clin Microbiol 2001:39:1339)。

因此，需要具有改善的诊断特性(例如改善的特异性和敏感度)的针对CagA+幽门螺杆菌的诊断测试。

此外，不同幽门螺杆菌分离株之间的DNA序列有很大的差异。某些CagA变体与胃癌风险的相关性更高。因此，能够识别CagA菌株类型也是有用的。

还需要特异性结合抗体、特别是结合CagA蛋白的抗体的CagA肽。

发明内容

本文提供了有关来自CagA的肽的信息，其可用于与幽门螺杆菌相关的疾病有关的诊断应用，包括识别处于胃癌发生高风险的个体。幽门螺杆菌感染的个体将产生针对幽门螺杆菌蛋白质的抗体，其包括CagA。因此，CagA特异性抗体的存在表明幽门螺杆菌感染。

从感染的个体中存在的所有CagA肽中，我们已经1)定义了哪个子集是免疫原性的并引发抗体应答(参见表1，其中蛋白质长度的34％是免疫原性的)。已发现，许多肽也与未感染的患者的血清反应(图1中的白条)。在免疫原性肽的子集中，我们确定了2)具有诊断能力的较小的肽子集；最后，在诊断肽的这一子集中，我们已经3)确定了具有最高诊断能力的肽所共有的关键氨基酸序列。换言之，诊断能力不仅源于被感染的个体中是肽的存在/不存在，而且关键地还源于始终引发未被感染的个体中不存在的抗体应答的免疫原性肽的仅仅一个小子集。

通过利用高精度的血清学检测方法，在肽水平而非蛋白质水平上的解析，我们确定了仅在携带CagA+幽门螺杆菌的个体中对其具有强抗体应答的肽，而排除了由于在肽缺乏CagA+幽门螺杆菌感染的个体中的交叉反应抗体应答而引起假阳性的肽。因此，我们已经确定的诊断肽同时具有高的灵敏度和特异性，如通过ROC AUC值确定的那样，将对诊断应用有效。