[发明专利]靶向性新表位载体及其方法

权利要求书

1.一种生成用于在哺乳动物的免疫疗法中使用的重组表达构建体的方法，该方法包括：

生成具有编码多表位的序列的第一重组核酸，其中该多表位包含多个经过滤的新表位序列，其中通过将同一患者的肿瘤与匹配的常态对照进行比较来在计算机中过滤核酸序列；其中在计算机中过滤所述核酸序列以对MHC-II的结合亲和力等于或小于200nM；

其中该多表位进一步包含将该多表位引导至亚细胞位置的运输元件，该亚细胞位置选自下组，该组由以下组成：循环内吞体、分选内吞体和溶酶体；

其中该第一重组核酸包含与编码该多表位的序列可操作地连接的第一启动子，以驱动该多表位在哺乳动物中表达；其中重组核酸是用于生成重组腺病毒的穿梭载体；以及

生成具有编码该多表位的序列的第二重组核酸，其中该第二重组核酸包含与编码该多表位的序列可操作地连接的第二启动子，以驱动该多表位在非哺乳动物细胞中表达。

2.如权利要求1所述的方法，其中该第一启动子是组成型启动子，或者其中该第一启动子能够被低氧、IFN-γ或IL-8诱导。

3.如权利要求1所述的方法，其中该运输元件选自下组，该组由以下组成：CD1b前导序列、CD1a尾、CD1c尾和LAMP1-跨膜序列。

4.如权利要求1所述的方法，其中该第一重组核酸(a)进一步包含编码第二多表位的另外的序列，其中该第二多表位包含将该第二多表位引导至不同亚细胞位置的第二运输元件，并且其中该第二多表位包含多个第二经过滤的新表位序列，或

(b)进一步包含序列，该序列编码共刺激分子、免疫刺激细胞因子和干扰或下调检查点抑制的蛋白质中的至少一种。

5.如权利要求1所述的方法，其中该第一重组核酸在细菌细胞或酵母细胞中复制，或是用于生成重组病毒的穿梭载体。

6.如权利要求1所述的方法，其中该第二启动子是组成型细菌或酵母启动子。

7.如权利要求1所述的方法，其中该非哺乳动物细胞是大肠杆菌细胞或酿酒酵母细胞。

8.如权利要求1所述的方法，该方法进一步包括以下步骤：

将该第二重组核酸转染到细菌细胞或酵母细胞中；

在该细菌细胞或酵母细胞中表达该多表位；以及

将该细菌细胞或酵母细胞配制成注射用药物配制品。

9.如权利要求4所述的方法，其中该经过滤的新表位序列中的至少一个和该第二经过滤的新表位序列中的至少一个是相同的。

10.如权利要求4所述的方法，其中该共刺激分子选自下组，该组由以下组成：CD80、CD86、CD30、CD40、CD30L、CD40L、ICOS-L、B7-H3、B7-H4、CD70、OX40L、4-1BBL、GITR-L、TIM-3、TIM-4、CD48、CD58、TL1A、ICAM-1和LFA3。

11.如权利要求4所述的方法，其中该免疫刺激细胞因子选自下组，该组由以下组成：IL-2、IL-12、IL-15、IL-15超激动剂、IL-21、IPS1和LMP1。

12.如权利要求4所述的方法，其中进行干扰的蛋白质是CTLA-4、PD-1、TIM1受体、2B4或CD160的抗体或拮抗剂。

13.如权利要求5所述的方法，其中该重组病毒是腺病毒。

14.如权利要求13所述的方法，其中该腺病毒包含E1和E2b基因缺失的至少一个。