[发明专利]遗传工程化的非人类哺乳动物及其构建方法和应用有效
申请号: | 201880028071.9 | 申请日: | 2018-04-28 |
公开(公告)号: | CN110691512B | 公开(公告)日: | 2021-11-09 |
发明(设计)人: | 王淼;陈虹 | 申请(专利权)人: | 中国医学科学院阜外医院 |
主分类号: | C12N15/90 | 分类号: | C12N15/90 |
代理公司: | 北京永新同创知识产权代理有限公司 11376 | 代理人: | 栾星明;王子楠 |
地址: | 100037 *** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 遗传工程 人类 哺乳动物 及其 构建 方法 应用 | ||
1.遗传工程化的非人类哺乳动物细胞、器官或组织,其基因组中的ApoE基因被功能性失活,其中所述基因组中包含外源性多核苷酸,所述外源性多核苷酸包含一或多种B族I型清道夫受体(SR-BI)敲低因子的编码序列和/或一或多种血管收缩物的编码序列,所述SR-BI敲低因子的编码序列与组织特异性启动子可操作地连接,所述血管收缩物的编码序列与可诱导型启动子可操作地连接。
2.根据权利要求1所述的细胞、器官或组织,其中所述外源性多核苷酸插入ApoE基因,或置换ApoE基因的部分或全部序列,且所述插入或置换导致所述功能性失活。
3.根据权利要求1或2所述的细胞、器官或组织,其中所述组织特异型启动子为ApoE基因启动子。
4.根据权利要求1或2中任一项所述的细胞、器官或组织,其中,所述SR-BI敲低因子包括蛋白水平敲低因子和/或转录水平敲低因子。
5.根据权利要求4所述的细胞、器官或组织,其中,所述蛋白水平敲低因子为SR-BI活性阻遏蛋白,所述转录水平敲低因子为siRNA。
6.根据权利要求5所述的细胞、器官或组织,其中,所述SR-BI活性阻遏蛋白为PDZK1蛋白的阻遏蛋白。
7.根据权利要求1、2、5和6中任一项所述的细胞、器官或组织,其中所述编码所述SR-BI敲低因子的多核苷酸序列侧翼包含重组酶系统元件。
8.根据权利要求7所述的细胞、器官或组织,其中,所述重组酶系统为FLP/FRT重组酶系统,且所述元件是FRT序列。
9.根据权利要求5或6所述的细胞、器官或组织,其中所述siRNA的编码序列为与SEQ IDNO.4所示的序列具有56%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%或100%相同性的序列。
10.根据权利要求1、2、5、6和8中任一项所述的细胞、器官或组织,其中所述血管收缩物为血管紧张素II。
11.根据权利要求10所述的细胞、器官或组织,其中,所述血管紧张素II与标签共表达,所述标签选自荧光素酶、高斯荧光素酶、萤火虫荧光素酶、海参荧光素酶和荧光蛋白中的一种。
12.根据权利要求1、2、5、6、8和11中任一项所述的细胞、器官或组织,其中所述诱导型启动子为化学物质诱导型启动子。
13.根据权利要求12所述的细胞、器官或组织,其中所述化学物质诱导型启动子为受四环素诱导的启动子。
14.产生遗传工程化的非人类哺乳动物的方法,包含:
功能性失活动物胚胎干细胞或受精卵或生殖细胞基因组中的ApoE基因;以及
将外源性多核苷酸整合入所述动物胚胎干细胞或受精卵的基因组中,所述外源性多核苷酸包含一或多种B族I型清道夫受体(SR-BI)敲低因子的编码序列和/或一或多种血管收缩物的编码序列,
所述SR-BI敲低因子的编码序列与组织特异性启动子可操作地连接,所述血管收缩物的编码序列与可诱导型启动子可操作地连接。
15.根据权利要求14的方法,其中所述功能性失活通过将所述外源性多核苷酸整合入ApoE基因实现。
16.根据权利要求14的方法,其中所述整合通过CRISPR/Cas9系统介导的定点同源重组进行。
17.根据权利要求14-16中任一项所述的方法,其中所述组织特异型启动子为ApoE基因启动子。
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