[发明专利]遗传工程化的非人类哺乳动物及其构建方法和应用

权利要求书

1.遗传工程化的非人类哺乳动物细胞、器官或组织，其基因组中的ApoE基因被功能性失活，其中所述基因组中包含外源性多核苷酸，所述外源性多核苷酸包含一或多种B族I型清道夫受体(SR-BI)敲低因子的编码序列和/或一或多种血管收缩物的编码序列，所述SR-BI敲低因子的编码序列与组织特异性启动子可操作地连接，所述血管收缩物的编码序列与可诱导型启动子可操作地连接。

2.根据权利要求1所述的细胞、器官或组织，其中所述外源性多核苷酸插入ApoE基因，或置换ApoE基因的部分或全部序列，且所述插入或置换导致所述功能性失活。

3.根据权利要求1或2所述的细胞、器官或组织，其中所述组织特异型启动子为ApoE基因启动子。

4.根据权利要求1或2中任一项所述的细胞、器官或组织，其中，所述SR-BI敲低因子包括蛋白水平敲低因子和/或转录水平敲低因子。

5.根据权利要求4所述的细胞、器官或组织，其中，所述蛋白水平敲低因子为SR-BI活性阻遏蛋白，所述转录水平敲低因子为siRNA。

6.根据权利要求5所述的细胞、器官或组织，其中，所述SR-BI活性阻遏蛋白为PDZK1蛋白的阻遏蛋白。

7.根据权利要求1、2、5和6中任一项所述的细胞、器官或组织，其中所述编码所述SR-BI敲低因子的多核苷酸序列侧翼包含重组酶系统元件。

8.根据权利要求7所述的细胞、器官或组织，其中，所述重组酶系统为FLP/FRT重组酶系统，且所述元件是FRT序列。

9.根据权利要求5或6所述的细胞、器官或组织，其中所述siRNA的编码序列为与SEQ IDNO.4所示的序列具有56％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％相同性的序列。

10.根据权利要求1、2、5、6和8中任一项所述的细胞、器官或组织，其中所述血管收缩物为血管紧张素II。

11.根据权利要求10所述的细胞、器官或组织，其中，所述血管紧张素II与标签共表达，所述标签选自荧光素酶、高斯荧光素酶、萤火虫荧光素酶、海参荧光素酶和荧光蛋白中的一种。

12.根据权利要求1、2、5、6、8和11中任一项所述的细胞、器官或组织，其中所述诱导型启动子为化学物质诱导型启动子。

13.根据权利要求12所述的细胞、器官或组织，其中所述化学物质诱导型启动子为受四环素诱导的启动子。

14.产生遗传工程化的非人类哺乳动物的方法，包含：

功能性失活动物胚胎干细胞或受精卵或生殖细胞基因组中的ApoE基因；以及

将外源性多核苷酸整合入所述动物胚胎干细胞或受精卵的基因组中，所述外源性多核苷酸包含一或多种B族I型清道夫受体(SR-BI)敲低因子的编码序列和/或一或多种血管收缩物的编码序列，

所述SR-BI敲低因子的编码序列与组织特异性启动子可操作地连接，所述血管收缩物的编码序列与可诱导型启动子可操作地连接。

15.根据权利要求14的方法，其中所述功能性失活通过将所述外源性多核苷酸整合入ApoE基因实现。

16.根据权利要求14的方法，其中所述整合通过CRISPR/Cas9系统介导的定点同源重组进行。

17.根据权利要求14-16中任一项所述的方法，其中所述组织特异型启动子为ApoE基因启动子。